开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题的研究背景、意义和目的
近年来许多研究结果表明糖尿病可能诱发患者认知功能障碍。高糖代谢记忆效应是影响糖尿病并发症发生发展的重要因素，指糖尿病患者即使在血糖水平恢复正常后仍易发生糖尿病并发症。氧化应激和晚期糖基化终产物（Advanced glycation end products,AGEs）是形成高糖代谢记忆的基础，与糖尿病及AD的发生发展密切。胰高血糖素样肽-1（Glucagon-like peptide-1,GLP-1）是治疗糖尿病的理想药物分子。同时，GLP-1受体（GLP-1 receptor, GLP-1R）在神经细胞表面也有一定分布，且GLP-1及其类似物均能通过血脑屏障直接在中枢神经系统发挥作用。近年，GLP-1及其类似物在中枢神经系统疾病治疗中的应用引人瞩目，GLP-1对代谢记忆的清除可能是其防治糖尿病认知障碍的关键环节，而其具体作用及途径亟待进一步阐明。
FoxO是可调节细胞氧化应激、增殖及凋亡等多种重要生理活动的转录因子。有研究表明 GLP-1可通过内皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、AKT通路调控胰岛beta;细胞FoxO1磷酸化，促进beta;细胞增殖，及GLP-1通过调控Sirt1，增加FoxO1乙酰化水平，促进beta;细胞增殖。FoxO在AGEs/RAGE/ROS信号轴介导“代谢记忆”形成中具有重要作用，然而GLP-1受体介导的神经元FoxO转录因子活性调控机制及其 AGEs/RAGE/ROS信号系统中如何发挥作用，目前尚不清楚。
本课题拟探讨GLP-1对代谢记忆致PC12细胞损伤的干预作用及初步机制。首先高糖诱导后撤离复制神经元细胞损伤模型，采用GLP-1或其类似物（Exendin-4）进行药物干预，并初步探讨GLP-1调节FoxO蛋白磷酸化水平的机制，同时分析 AKT、Sirt1途径在GLP-1受体介导的FoxO活性调控机制中的作用。为 GLP-1防治糖尿病认知障碍提供新的研究思路及实验依据。
- 课题研究的主要内容
1、高糖诱导后撤离诱导神经元损伤模型的建立及GLP-1激动剂的干预作用
1.1高糖诱导后撤离神经元细胞代谢记忆模型的建立及药物干预
（1）实验中分别采用含高浓度葡萄糖（6.75, 9, 13.5, 18, 22.5, 27, 31.5 mg/ml）与神经元细胞株或原代海马神经元共孵育 24、48、72、96 h 后撤离，换液含正常浓度葡萄糖（4.5 mg/ml）的培养液；实验同时设对照组。
（2）药物干预：实验组中神经元损伤模型建立的同时分别与100nM GLP-1、exendin-4共孵育，对照组加入等量相同培养基，MTT法检测各实验组细胞损伤情况。
1.2高糖代谢记忆对胞内ROS生成的影响及GLP-1R激动剂的干预作用
造模后药物干预第8天收集细胞，DCFH-DA探针法检测各实验组细胞内ROS水平。
