基于Hsp90 ATPase活性的抑制剂筛选模型研究
癌症是指机体在环境污染，化学毒素，电离辐射，自由基毒素，微生物及其代谢毒素，遗传特性，内分泌失衡，免疫功能紊乱等环境影响下，导致身体正常细胞发生癌变，表现为局部组织异常增生的一种疾病。癌细胞使患者体内的营养物质大量被消耗,转移到全身各处，导致人体消瘦，无力，贫血，食欲不振，发热以及肝脏脏器功能缺损等不良症状，最终破坏组织器官的结构和功能,引起坏死出血合并感染,患者最终由于器官功能衰^而死亡。
目前癌症的治疗方式主要有手术治疗，放射治疗和化学治疗。而化学治疗是治疗癌症最主要的方式。化学疗法是用化学合成的药物来杀灭肿瘤细胞。常采用的抗癌药物主要有化学药物,中药,生物制药,靶向药物等等。靶向药物往往是直接作用与DNA ,或作用于由于基因变异而过度表达的酶,如一些Kinases, PI3Ka/mToR, PAK4, PDK系列，以及热休克蛋白系列。作用于DNA的药物往往是通过干扰癌症细胞的转录，或者结合于癌症细胞的DNA分子上，从而破坏癌症细胞的DNA而产生作用。这一类药物有抗代谢药，烷化剂等等。近年来,人们开始把目光投向蛋白靶向药物，这类药物通过与特异性的蛋白发生作用从而抑制癌症的发生和发展。开发这些蛋白酶抑制剂，作为高效抗癌新药是采取个案化治疗最有效的手段之一。
热休克蛋白( Heat shock proteins, Hsps) 作为分子伴侣广泛存在于各种原核细胞及真核细胞内。它可以在短时间内对细胞内受损而变形的蛋白进行正确的折叠， 维持其正确的构象，因此在恶劣环境中对维持细胞正常生命活动至关重要。它可以在短时间内对细胞内受损而变形的蛋白进行正确的折叠，维持其正确的构象，因此在恶劣环境中对维持细胞正常生命活动至关重要。 热休克蛋白90(Heat shock protein，Hsp90) Hsp90是Hsps 家族中的一员，在细胞的生命活动中扮演重要的角色，其含量约占细胞蛋白总量的1%-2% (质量分数)。参与调控肿瘤细胞多条信号通路，对肿瘤细胞生长有重要作用。Hsp90发挥作用依赖于ATP的存在，ATP水解过程释放出能量帮助Hsp90行使功能。鉴于Hsp90 ATPase活性特点，对其活性的研究及在此基础上寻找和发现Hsp90抑制剂，对开发靶向抗肿瘤药物研究具有重要的指导意义。
本课题将Hsp90表达载体于宿主大肠杆菌中表达。通过孔雀绿磷钼酸铵一无机磷检测法，测定异源表达的Hsp90 ATPase活性。基于该方法，建立Hsp90 ATPase活性抑制剂筛选模型，以17-DMAG阳性对照，对本课题合成的HSP90抑制剂进行酶活性检测。初步考察其反应活性,从而为寻找抑制Hsp90的先导化合物研究铺路。
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资料编号：[391488]
