开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一.拟研究或解决的问题
本课题意在论证以小鼠的脂肪组织作为靶组织,研究姜黄素对于内质网应激引起的脂解反应的抑制作用。
内质网应激可以通过cAMP/PKA通路引起脂肪组织脂解反应。PKA介导的脂解反应是经典的脂解信号通路。HSL被PKA磷酸化后可以由胞质向脂滴易位,我们发现在ERS条件下,PKA对HSL660丝氨酸位点的磷酸化显著增强,从而加速脂解反应。
我们设想药物姜黄素可以对抗内质网应激抑制脂肪组织脂解反应。姜黄素可以显著抑制PKA对HSL和围脂滴蛋白A的磷酸化活化,抑制脂肪分解,降低脂肪组织脂解产生的FFA,从而减弱了脂质异位沉积,降低脂毒性。
由于内质网应激状态下的脂解机制是复杂的,也可能存在其他的脂解通路参与了调节,这还有待我们进一步验证。同时造成脂肪组织过度脂解的原因不局限于内质网应激,还包括脂肪组织缺氧、炎症等病理因素,因此未来仍有许多有意义的实验值得我们去探索。
二.采用的研究手段
1.短期高脂饲喂ICR小鼠,取其脂肪组织备用,同时制备脂肪组织上清(AT-CM)。
2.WB检测脂肪组织膜感应蛋白p-IRE1alpha;和p-eIF2alpha;的表达,同时检测PKA和p-HSL的表达
3.ELISA检测脂肪组织中cAMP和AMP的含量。
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