一种自组装多肽的酵母表达系统的构建课题性质 radic; 基础研究应用课题设计型 调研综述 理论研究开题报告内容：一．拟研究的问题近年来，多肽自组装逐渐成为材料学和生物医学等领域的研究热点。
由于多肽自身具有良好的生物相容性、可控的降解性能和种类多样性，利用多肽自组装技术构建的各种功能性材料在药物控制释放、组织工程支架材料以及生物矿化等领域内有着巨大的应用前景。
目前研究较多的是小分子多肽自组装，本项目拟设计一种大分子自组装多肽，因长度大于50个氨基酸的多肽不易于化学合成，所以拟将其编码基因克隆到表达载体上，通过酵母表达系统合成此类多肽。
二．实验方法2.1 设计目的基因序列2.2PCR体外扩增目的基因①按顺序在0.5mL的离心管中加入下列试剂 10 X PCR Buffer5mu;L 20mmol/L 4种dNTP mixture4mu;L BSA(25mg/mL) 2mu;L 上游引物（20mu;mol/L）2.5mu;L 下游引物（20mu;mol/L）2.5mu;L1~5U/mu;L DNA Polymerase 1~2U模板DNA10~10^5拷贝加入灭菌分装的ddH2O使总体积为50mu;L②将各管PCR反应混合液充分混匀③进行PCR循环，电泳检测。
2.3 将PCR产物与载体连接取PCR产物与大肠杆菌16℃过夜连接。
第二天取5mu;L转化大肠杆菌感受态，涂含有100 mg/L氨苄青霉素的LB平板，37℃过夜培养，相应酶切鉴定转化子。
将质粒酶切克隆到相应位点。
2.4 大肠杆菌感受态制备与转化方法①从新活化的E.coli平板上挑选一单菌落，接种于LB液体培养基中，37℃培养至对数生长期。
②将菌悬液以1：100~1：50转接于100mL LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现浑浊后，每隔20~30 min测一次OD600,至OD600为0.3~0.5时停止培养，转装到1.5mL离心管中。
③培养物于冰上放置20 min.（接下来的操作在冰上进行）④0~4℃，4000g离心10 min，弃去上清液，加入1mL冰冷的0.1 mol/L CaCl2溶液，小心悬浮细胞，冰浴20 min.⑤0~4℃，4000g离心10 min,弃去上清液，加入100mu;L冰冷的0.1mol/L CaCl2溶液，小心悬浮细胞，冰上放置片刻后，即制成感受态细胞悬液。
