开题报告内容:
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【研究背景】
脂肪组织与血管在解剖上和功能上密切相连,几乎所有的血管周围都有脂肪组织,脂肪组织可以分泌上百种脂肪因子来影响血管的结构和功能,维持血管功能的稳态。在肥胖或2型糖尿病病人的脂肪组织中存在大量的炎性细胞浸润,引起脂肪细胞炎性反应,其表现就是脂肪因子表达紊乱,炎性因子可以通过损伤胰岛素受体底物-1的功能而引起局部或系统性的胰岛素抵抗。另外也可以直接或间接地引起血管内膜功能的紊乱。血管内膜功能紊乱的特征性表现即:胰岛素作用下NO释放减少从而导致血管内膜舒张功能减弱及炎性细胞损伤因子如内皮素-1(endothelin-1, ET-1),纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1)的释放量增加,致炎因子(如:TNF-alpha;,IL-6等)、黏附因子过度表达,使得内膜完整性和功能性受损而导致实质性损害。
【研究方法】
首先制备脂肪组织炎性上清:
大鼠断头后,泡入酒精中几分钟,取出放入超净台,打开胸腔,取胸主动脉条,取下动脉周围附带脂肪,称重。
将脂肪组织用PBS漂洗后,剪碎,放入含有培养基的六孔板中培养,用棕榈酸进行炎性刺激2h,洗掉后换新鲜培养基,继续培养脂肪组织24h,收集上清,用于动脉条实验。
动脉条实验大鼠胸主动脉环的制备及内皮依赖性血管舒张活性的检测
选取雄性SD大鼠,体重180-220 g,断头处死后迅速打开胸腔取出胸主动脉,置于通95%O2 5%CO2混合气体的K-H液中,仔细分离血管周围组织,清除血管内血液,剪成2-3 mm长的血管环,钢钩固定于含K-H液的浴皿中,并通过张力换能器连于BL-410生物机能实验系统记录仪。给予血管环2 g的静息张力,平衡90 min后,重复两次加入高K 液,预收缩血管条,若两次高K 下血管环收缩的幅度一致,则表明血管活性良好。然后用K-H液洗脱达基线。待动脉环稳定后,先以去甲肾上腺素(110-6 M)收缩血管环,然后分别用累加剂量乙酰胆碱 (终浓度:110-9,110-8,110-7, 110-6及1105 M) 舒张血管,若加乙酰胆碱后使去甲肾上腺素预收缩的血管舒张幅度>80%,认为内皮完整,可继续进行下一步实验。先用炎性上清分别孵育动脉环30min,洗掉后,加入苯肾上腺素(110-6 M)收缩血管环,然后分别用累加剂量乙酰胆碱 (终浓度:110-9,110-8,110-7, 110-6及1105 M) 舒张血管,观察血管舒张率的变化。
