开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
研究背景：
急性肺损伤 (acute lung injury，ALI) 是各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致的急性低氧性呼吸功能不全。 其一般由严重感染、创伤、败血症、急性损伤休克等疾病引起。起病急而严重,国内发病率和病死率达20%~40%,尤其在ICU病房中更是高达50%左右,目前尚无有效治疗手段[1]。体内失控性释放的大量炎症介质与ALI的发病密切相关, 研究显示当机体遭受外部刺激(如LPS刺激)时, 机体激活巨噬细胞释放大量炎症细胞因子如白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子alpha;(TNF-alpha;)等, 进一步激活包括巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞和内皮细胞, 并释放氧自由基、蛋白溶解酶、花生四烯酸等产物, 介导肺部炎症反应失控所造成的肺泡-毛细血管膜的损伤, 形成级联瀑布效应, 引发全身炎症反应。
急性肺损伤模型大体可以分为以下几种：1.肺内型：①整肺灌洗型，②盐酸吸入型；③机械通气相关肺损伤，④脂肪微栓塞型；2.肺外型：①物理打击型，②内脏损伤诱发型，③两次打击模型；3.其它：①内毒素型，②炎性因子或效应细胞诱发型③气体吸入型等等。
本法采用内毒素型制造ALI模型。内毒素是革兰氏阴性细菌细胞外膜成分, 主要致病物质是脂多糖, 进入机体可建立感染后的ALI 模型。致伤方法有:1.静脉法；2.腹腔注射法；3.气管法( 滴入或雾化吸入)。前二者属肺部原因诱发的急性呼吸窘迫综合征（ARDSexp）,后者则属肺外原因诱发的急性呼吸窘迫综合征（ARDSp）。静脉给药速度宜慢而匀(30分钟),经气管给药则病变更偏重于肺部。须注意动物种属, 细菌或内毒素的种属和批号, 剂量、给药途径均是影响模型成功与否的因素。内毒素进入体内后激活巨噬细胞释放前炎性因子,趋化并激活中性白细胞(PMN)在肺内扣押产生局部炎症反应而产生肺损伤；且内毒素本身对肺血管内皮也有损伤作用。
巨噬细胞在特异性和非特异性炎症过程中都起到决定性作用。用脂多糖(LPS)活化巨噬细胞常用于评价众多药物的抗炎活性。LPS活化的巨噬细胞会分泌多种细胞因子,例如肿瘤坏死因子alpha;(TNF-alpha;)、白细胞介素lbeta;（IL-1beta;）、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)等；还可产生多种炎性介质,如一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)等。大量产生这些细胞因子和炎性介质能够导致全身性炎症反应综合症(SIRS)、严重的组织损伤,甚至内毒素性休克。将LPS滴入鼻内是一种公认的制造ALI模型的方法, 这种方法可以控制ALI的产生, 而不会引起全身的炎症和器官衰竭。
本实验计划通过观察急性肺损伤小鼠相关指标的变化和抑制小鼠巨噬细胞Raw264.7释放NO实验结果，确定一种甾体化合物Me防治ALI的药效学作用并初步评价其体外抗炎活性。
研究方法：
1.NO抑制实验方法
小鼠巨噬细胞 Raw 264.7 购于中国科学院上海细胞所。细胞用DMEM培养基加10%血清在37 ℃，5% CO2培养箱进行培养。分组情况如下：正常对照组、模型组（100ng/ml LPS）、受试化合物组。每组设3个复孔。
