开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
（1）主要研究内容、预期成果
核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3炎性小体）作为免疫反应的重要参与成分，与其下游分子在一系列炎症性疾病的发生、发展过程中扮演了重要的角色，因此，对NLRP3炎性小体的抑制可以为相关炎性疾病的缓解和治疗提供有效方案。
作为NLRP3炎性小体的核心蛋白，NOD样受体NLRP3是免疫信号激活的重要通路，也是抑制剂作用的主要靶点。因此，获得高纯度的NLRP3全长蛋白，可为体外研究提供充足目的蛋白，例如为抑制剂的体外亲和实验提供材料。
本实验课题基于前人对重组蛋白的原核表达、包涵体蛋白的变复性以及重组蛋白的亲和层析纯化的研究，通过大肠杆菌系统的原核表达、一步变性法和梯度透析复性法，以及Ni柱亲和层析法，构建了针对NLRP3全长蛋白的表达和纯化方案，为蛋白质包涵体的表达与纯化以及NLRP3蛋白的获得提供了新的可借鉴方案，也为进一步针对NLRP3蛋白的研究提供原材料。
（2）拟采用的研究思路
研究方法：1）本研究基于前人对重组蛋白的原核表达、包涵体蛋白的变复性以及重组蛋白的亲和层析纯化的研究，初步构建NLRP3全长蛋白的表达和纯化方法。2）利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）和免疫印迹法（WB），针对蛋白表达结果、包涵体变复性结果和纯化结果分别进行分析验证。3）在前一步的基础上优化实验条件，最终获得纯化后的NLRP3全长蛋白。
技术路线：文献研究，初步构建蛋白原核表达、包涵体变复性以及重组蛋白纯化的方法——验证方法可行性（表达菌活化→扩增→表达→纯化）——利用SDS-PAGE和WB分析实验结果——优化实验方案——获得纯化后的NLRP3全长蛋白
（3）现有工作基础
本人通过大量阅读NLRP3蛋白、重组蛋白表达方法、包涵体以及重组蛋白纯化等相关文献，拥有一定的知识储备和研究基础；并通过对生物实验的初步学习，基本掌握了大肠杆菌活化、扩增，以及层析柱的操作要点；同时，对NLRP3包涵体蛋白有一定学习基础，为接下来的研究开展做了较好的铺垫工作。
