姓名

陈法琼

学号

1241410

专业

药物分析

指导教师

韩怡

课题名称

曲尼司特原料药微生物限度检查方法学研究

课题性质

✔ 基础研究 应用课题 设计型 调研综述 理论研究

1. 文献综述

摘要：为配合曲尼司特原料药生产、储存及临床应用^[1-2]，通过对用于曲尼司特原料药微生物限度检查的计数培养基及供试品计数方法进行适用性试验，以确定所采用的微生物限度检查方法适合该产品的微生物计数。按常规方法制备供试液时，制剂中的主要化学成分存在明显的抑菌活性，难以确保试验结果的可靠性^[3-7]。在消除了曲尼司特原料药的抑菌性的前提下，根据药典确定的曲尼司特原料药控制菌，对曲尼司特原料药的控制菌进行检查，以确保曲尼司特原料药适用于生产的需要。

关键词：曲尼司特原料药；微生物限度检查；微生物检查方法学研究；适用性试验；平皿法；三次独立平行试验；

1.概述

曲尼司特(tranilast,TNL)（利喘贝），化学名称为N-（3,4-二甲氧基肉桂酰）氨茴酸^[8]，该药在70年代首先由日本江田等人研制成功,其国外商品名为Tranilast或Rizaben，国内于1983年由南京药学院（中国药科大学）制药厂首先研制开发成功,1988年4月由卫生部批准生产。作为原新药西药二类新药收载于中华人民共和国卫生部部颁标准WS1-277 (X-36)-88。曲尼司特以曲尼司特粉为主药，内容物为无臭、无味的淡黄色粉末^[9]，易溶于N,N-二甲基甲酰胺，溶于吡啶、二氧六环，微溶于甲醇、乙醇、丙酮、三氯甲烷，不溶于水、苯、环己烷，mp211~213℃。是一种与H1,H2受体阻断剂作用不同的过敏介质阻释剂，被临床广泛应用。

2.药理作用和作用机制

曲尼司特具有稳定肥大细胞和嗜碱性粒细胞的细胞膜作用，阻止其脱颗粒，从而抑制组胺，5-羟色胺过敏性反应物质的释放^[10],同时对浆细胞的IgE产生株也有抑制作用，是一种针对过敏性疾病发生机制的病因治疗性药物^[11],早期临床用于治疗Ⅰ型变态反应疾病如支气管哮喘和过敏性鼻炎等^[12],也是有效的抗变态反应药物^[13-14]。

3.药代动力学

曲尼司特主要分布于血管外的全身组织中, 脂肪内浓度最高, 其次为肝、肾上腺和胰脏。血液中33-47%曲尼司特的存在血浆中,4-9%存在于淋巴细胞中,5-12%存在于中性粒细胞中,41-58%存在于红细胞中。血浆中90%的曲尼司特与蛋白(主要为脂蛋白)结合。药物动力学研究表明：人体给药后2~3h达到最高血药浓度，半衰期为8.6h左右。至24h血药浓度明显降低，48h后难于检出，给药后主要从尿中排出。体内代谢产物是曲尼司特的4位脱甲基物以及硫酸和葡萄糖醛酸的结合物^[15]。

4.毒理学资料

• 1. 急性毒性LD50（mg/kg） 小鼠，口服，780（雄）；小鼠，腹腔注射，4109（雄）；小鼠，皮下注射，2630（雄）。大鼠，口服，1600（雄）；大鼠，腹腔注射，4059雄）；大鼠，皮下注射，36309（雄）。

1. 慢性毒性 大鼠，口服给药62.5-800 mg/kg/日，连续5wk或26 wk;另犬口服给药20-80mg/(kg.d),连续5wk或52wk.结果在大鼠和犬高剂量组发现体重增长受抑,轻度贫血等,病理学检查未见异常。上述变化在停药迅速恢复。
2. 特殊毒性 小鼠以5-600 mg/(kg.d)进行试验,发现高剂量组骨骼异常的胎儿增加,但对大鼠,兔未见致畸作用。对生殖功能,分娩,新生儿发育均无影响;豚鼠致畸试验及coombs试验均无抗原性,诱变性。

5. 国内外关于曲尼司特的临床研究

• 1. 曲尼司特不同于其它对症疗法药，能阻断过敏反应发生的环节，是一种接近于病因疗法的口服抗变态反应新药。

1. 发作期服用曲尼司特可逐渐改善病情，1~4个星期以后，即可发挥优越的效果。一般2~3个月为一个疗程。
2. 曲尼司特可与其它平喘药并用，以曲尼司特胶囊作为基础处方药。有规则地连续服用，可长期控制哮喘的发作。
3. 严重患者长期连续服用曲尼司特可减少支气管哮喘、过敏性鼻炎等过敏性疾病的发作频率与程度，且可减少其它对症疗法用药的剂量。
4. 曲尼司特副作用少而轻，在4726例广泛调查中，副作用发现率仅2.48%。
5. 副作用
6. 极少数病人服用本药后，可能出现肝功能异常，此时可减量或停药观察。
7. 少数病人有恶心、头痛及膀胱炎样症状，由医生确定是否继续用药。如确属本品引起，一般停药后，以上症状即可消失。
8. 适应症

抗变态反应药，可用于预防和治疗支气管哮喘及过敏性鼻炎。

1. 研究目标

本试验针对曲尼司特原料药制定微生物限度检查方法，并对检查方法进行适用性试验以验证方法的可行性。

1. 研究方法

本试验验制定的曲尼司特原料药的微生物检测方法为：先对计数培养

基及供试品计数方法进行适用性试验，消除产品的抑菌性，以确认所采用的方法适合该产品的微生物计数，再通过微生物计数检测微生物。现在经常使用微生物计数方法主要有平皿法和膜过滤法，本试验采用平皿法。检查时，按已验证的控制菌检查方法及计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检查方法应重新验证。验证时，依各品种项下微生物限度标准中规定检查的控制菌选择相应验证的菌株，验证大肠菌群检查法时，应采用大肠埃希菌作为验证菌株。验证试验按供试液的制备和控制菌检查法的规定及下列要求进行。菌种及菌液制备 同控制菌检查用培养基的适用性检查。

本试验先检测曲尼司特原料药的抑菌性。再设置对照组消除曲尼司特原料药抑菌性来消除干扰，再选择合适的微生物计数方法对曲尼司特原料药进行微生物限度检测，本试验采用平皿稀释法对控制菌进行试验，并且加试验菌回收并且计算回收率 。再对实验结果的正确性以及准确性进行方法学验证。最后确定所选用的微生物限度的检查方法是否适合于曲尼司特原料药的微生物限度检查。

1. 预期结果

确定所选用的微生物限度的检查方法是否适合于曲尼司特原料药的微生物限度检查。

参考文献：

[1]陈新，陈钟华等.抗变态反应药曲尼司特稳定性实验[J].中国医药工业杂志，1985，16:149.

[2]杨玉：新药与临床，1988,7:129.

[3]高新贞，陈静，百秀萍.药品微生物限度检查验证方法在保健品中的应用研究[J].食品与药品，2010,20（11）：433-436.

[4]陈晓梅.国玉伤痛软膏微生物限度检查方法的建立[J].当代医学（学术版），2008,2（20）：35-36.

[5]陆益萍.3种软膏剂的微生物限度检查方法的建立[J].安徽医药，2008,12（4）：318-319.

[6]李喜梅.皮肤创面诱导凝胶微生物限度检查验证[J].海峡药学，2015,18（2）：72-73.

[7]任敬超.含抑菌成分中成药固体制剂微生物限度检查验证方法的建立[J].黑龙江科技信息，2007,11（12）：209.

[8]赵飞浪，李克，等. 曲尼司特缓释胶囊在正常人体内的药代动力学及相对生物利用度[J].中国临床药理学杂志，1996.12（3）：164-167.

[9]陈新.抗变态反应新药——曲尼司特胶囊[J].中国医院药学杂志，1989，9（2）：77.

[10] 朱东方，陈幼亭.抗变态反应药物——曲尼司特[J].药物不良反应杂志,2001(2):133-135.

[11]杨玉.抗变态反应新药——曲尼司特胶囊[J].中国药学杂志，1989,9（2）：77.

[12]杨玉.曲尼司特治疗支气管哮喘和变应性鼻炎的临床对照试验[J].新药与临床，1988,7（3）：129~132.

[13] 药事研究会：月刊药事（日）,1982,24（7）：83.

[14]Koda A et al: Clin Immunol ,1976,57:396.

[15] 陈新.曲尼司特[J].中国医药工业杂志，1989,20（4）：153.

学生签名： 年 月 日

指导教师意见：

指导教师签名： 年 月 日

所在教研室审查意见：

负责人签名： 年 月 日