一、课题的研究背景、意义和目的
基因组计划研究表明, 在组成人类基因组的30亿个碱基对中, 仅1.5%的核酸序列用于蛋白质编码,其余98.5%的基因组为非蛋白质编码序列。这些序列曾被认为是在进化过程中累积的“垃圾序列”而未予以关注, 但在随后启动的ENCODE 研究计划中却发现, 75%的基因组序列能够被转录成RNA, 其中近74%的转录产物为非编码RNA(Non-coding RNA, ncRNA)。在非编码RNA 中, 绝大多数转录本的长度大于200 个碱基, 这些长链非编码RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)能够在转录及转录后水平上调节蛋白编码基因的表达, 从而广泛地参与包括细胞分化、个体发育在内的重要生命过程, 其异常表达还与多种人类重大疾病的发生密切相关。
近几年越来越多的研究表明在不同的时间和空间活化T细胞可以诱导其向不同的效应细胞分化，非编码RNA在免疫细胞的分化发育过程中发挥重要的调控作用，其中lncRNA在免疫系统T细胞的分化和活化过程中发挥重要的枢纽作用。现有证据表明lncRNA的表达异常，相应位置的SNP或碱基的突变或许与自身免疫性疾病的发生发展高度相关。
本课题在课题组前期构建好含目的序列的过表达重组表达载体的基础上，进行慢病毒包装条件的摸索与条件优化。实验对各种转染试剂、不同质粒比等包装条件进行比较，通过流式细胞术的方法，对感染的293T细胞中的绿色荧光蛋白的强度进行检测，以确定最优的慢病毒包装条件。
二、课题研究的主要内容
1、对EAE模型小鼠及正常对照组小鼠组织进行lncRNA芯片检测, 通过生物信息学分析筛选相关差异lncRNA，qPCR验证差异lncRNA，构建含目的序列的过表达重组表达载体。
2、采用不同转染条件进行慢病毒包装。
3、通过流式细胞术检测确定最优转染条件。
三、研究难点
1、慢病毒包装条件的确定及优化方法
