开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
背景:
结直肠癌是世界上第三个最常见的恶性肿瘤,也是美国癌症相关死亡的第二大原因。作为癌症的第七大类,与癌症相关的炎症与结直肠癌的发生发展密切相关,同时伴有其他因素如遗传异常和基因突变。已有证据表明,患者炎症性肠病(IBD),包括溃疡性结肠炎和克罗恩病,会增加发生结直肠癌的风险。因此,专家认为对高危个体的抗炎和抗致癌的化学预防干预措施是一个可行的替代方案。由于供应和安全,使用膳食补充剂来防止结肠癌的发生已经成为一个可行的和重要的战略。
金雀异黄素(GEN)是一种在大豆中发现的天然的异黄酮类化合物,提取于在亚洲国家流行的一种豆科植物。它对不同种类的癌症包括结肠直肠癌表现了包括化学预防特性在内的不同生理作用。现已有三十种GEN的衍生物被设计和合成。
其中,与其他衍生物相比genistein-27(GEN-27)对结肠癌细胞表现出了更有效的抗增殖活性。此前,Gen已被报道用于抑制AOM诱导结直肠癌。然而,GEN及其衍生物对结肠炎相关的结肠癌发展的影响还没有被研究过。
研究方法:
1.ELISA
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。称取组织适量,冰上匀浆,离心后收集上清,严格按照Elisa 试剂盒进行,以空白调零,450 nm 波长依次检测各孔光密度D( lambda;) 值。
2.免疫荧光检测
应用抗原-抗体反应原理来检测NLRP3,Nrf2等。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,即可查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
