拟研究及解决的问题:
TAN01属于茜草科类型环肽(RAs),为双环环六肽,其结构独特新颖,在体内外具有较强的抗肿瘤活性。所在研究组前期研究表明,RAs有很好的抗肿瘤和抗炎活性。本课题旨在研究TAN01的抗炎活性,拟采用细胞和分子生物学手段,研究TAN01在HCT116肿瘤细胞和T细胞中的抗炎活性,并对作用机制进行初步探讨。
研究手段:
(1)细胞培养
HCT116细胞培养:用含10% FBS的DMEM培养基,置5% CO2、37 ℃饱和湿度的细胞培养箱中培养,待细胞生长至对数期进行传代,2~3 d传代1次。细胞复苏后至少传代3次的细胞用于实验。
T细胞提取及培养:颈椎脱臼处死小黑鼠,用75%酒精喷湿透,伸入超净台,剖开小黑鼠腹部,轻轻扒开小肠,找到肠系膜并寻找淋巴结,用弯镊子取下,PBS清洗,然后放在匀浆器中匀浆,离心(1000 转,5分钟)后加入培养基,吹匀,接板。在接板培养基中加入刺激剂 (Con A:5 mu;g/ml)。
(2)ELISA分析
根据说明书采用ELISA试剂盒,检测给药后TNF-alpha;诱导HCT116细胞和刀豆蛋白诱导T细胞中炎症因子TNF-alpha;、IFN-gamma;、IL-2、IL-6的表达。
(3)PCR技术
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