一、课题解决的问题
玫瑰石斛(Dendrobium crepidatum Lindl. ex Paxt.)系兰科(Orchidaceae)植物。石斛属(Dendrobium Sw.)为兰科最大属之一,共有1500多种[1],广泛分布于亚洲、欧洲及大洋洲等热带及亚热带地区。我国约有80多种,主要分布于西南、华东及华南地区。在我国传统医学中,石斛为常用贵重药材,它具有滋阴清热、益胃生津,润肺止咳等功效,常用于热病伤津、口干烦渴、病后虚热等多种病症[2]。现代药理研究证明石斛具有抗衰老、抗肿瘤、降低血糖等作用,在治疗胃肠道疾病、白内障、关节炎、血栓闭塞性脉管炎及慢性咽炎等疾病有很好的疗效[3～5]。几十年来,中外学者对石斛属植物的化学成分和药理作用进行了大量的研究,发现石斛属植物中化学成分多种多样,其主要有效成分为生物碱及石斛类多糖,另外还有酚类、菲类、芪类、笏酮类、倍半萜类、甾体类及香豆素等[6]。
早在七八十年代，国外曾对其化学成分进行了初步研究，分离得到5个八氢中氮茚生物碱和1个联苄，其后罕见关于该植物化学成分的研究报道。而近年来研究发现，中氮茚生物碱具有镇痛抗炎、组胺H3受体拮抗剂免疫调节等生物活性。为了进一步寻找与石斛传统功效相关的活性物质，本课题组在前期对玫瑰石斛进行了系统的化学成分研究，分离得到10个生物碱类化合物，18个非生物碱化合物。
手性是三维物体的基本属性。当不存在外部影响时,对映体具有完全相同的化学和物理性质,但当其进入体内后,对映体与体内手性靶分子之间的匹配和分子识别不同,显示出不同的药理作用和毒副作用。所以单一对映体的药物研发成为了药物发展中的一个必然趋势。近些年,对于手性化合物的拆分方法的研究已经有了突破性的进展。而采用高效液相色谱方法进行对映体光学拆分,已成为测定光学纯度和获得光学纯药物的确实可行的方法。AD柱为多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱，硅胶表面涂敷有直链淀粉-三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）。其为目前世界上使用范围最广的一种手性填料，在各类文献中都报道了AD柱优秀的分离能力和耐受性。本课题组在确定玫瑰石斛生物碱绝对构型的过程中，发现生物碱Dendrocrepine F为一外消旋体，故本实验中选用大赛璐公司的CHIRALPAKAD-H色谱柱进行手性拆分，以期分离Dendrocrepine F中手性异构体。
炎症是具有血管系统的生物机体对损伤因子所发生的复杂的防御反应。当致炎因子作用于机体时，机体通过炎症反应消除致炎因子，这是一个损伤和抗损伤的过程。许多常见疾病 (如自身免疫性疾病、动脉粥样硬化、创伤修复等) 都属于炎症范畴。抗炎药是临床上仅次于抗感染药物的第 2 大类药物。凡能消除炎症的药物统称为抗炎类药物 ，它能够阻断炎症介质的产生或释放，抑制炎性反应。目前临床上应用抗炎药物大致可以分为3大类，即非甾体抗炎药、甾体抗炎药和中药。
故本课题的目的在于，以手性拆分的手段确定玫瑰石斛多种生物碱外消旋体的绝对构型，建立体外模型筛选玫瑰石斛生物碱，尤其是Dendrocrepine F中手性异构体的抗炎活性。
二、研究方法和技术路线
（1）利用高效液相色谱仪和手性分析柱，分析制备对映异构体，再通过圆二色谱法和单晶衍射确定化合物绝对构型；
（2）对分离得到的手性异构体化合物，通过对小鼠腹腔巨噬细胞释放NO、TNF-ａ、IL-1beta;、PGE的含量测定对其进行体外抗炎活性筛选。通过Western blot、PCR、免疫荧光、流式细胞术等方法确定作用的信号通路；
三、论文课题研究进度安排
