- 课题研究的背景与目的
动脉粥状硬化性（AS）疾病是严重危害人类健康的一大类疾病，是世界范围的主要死亡原因。AS主要累及大、中等动脉，表现为内膜脂质沉积，单核细胞和淋巴细胞浸润及血管平滑肌细胞增生等，形成泡沫细胞、脂纹和纤维斑块，引起血管壁硬化、官腔狭窄和血栓形成，可引发严重的心脑血管疾病及其他临床事件。
胆固醇是生物体内一种重要的脂类物质，胆固醇浓度异常增高及其功能状态的改变都可以导致增加动脉粥样硬化和心脏病的危险。高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平是心血管事件一个强烈的逆指标，HDL水平降低是AS进展的独立危险因素。HDL抗动脉粥样硬化主要通过其介导的胆固醇逆向转运（RCT）过程来实现。
实验室前期发现盐酸苄丝肼对RCT（胆固醇逆转录途径）过程中两个重要的受体蛋白ABCA1及SRB1具有显著作用。本实验通过研究苄丝肼对肝脏细胞B类1型清道夫受体（SRB1）作用的研究进一步确证苄丝肼对动脉粥状硬化的影响机制。
- 研究内容和拟解决的主要问题
- HepG2细胞（肝癌组织细胞）加入OXLDL得到细胞模型。并加入不同浓度 药物进行ELISA得到药物最佳作用浓度。
- 流式细胞法研究HDL与受体在不同药物作用下结合情况。
- PCR研究药物作用于模型细胞时关键受体蛋白mRNA表达，探索药物影响 RCT中胆固醇摄取的分子机制。
4.Western blotting研究药物作用于模型细胞时关键蛋白水平的变化。
三、课题研究的主要内容和实验方法
1、oxldl刺激HepG2细胞造模
2、ELISA方法确定药物作用下SRB1表达情况
采用传代4代生长于含10%胎牛血清的DMEM培养液的HepG2细胞，将生长接近融合的HepG2细胞以1times;105细胞/孔的密度均匀接种于96孔培养板。培养24h细胞贴壁后，将细胞分为空白组、模型组、药物组。除空白组外，其余组用100mu;g/ml浓度oxldl刺激，作用24h后，药物组分别加入不同浓度药物（10-5、10-6、10-7、10-8M）各100mu;l，置于培养箱中培养。孵育24h后，弃培养液，洗涤干燥后进行cell-based ELISA检测。
- QPCR观察该受体蛋白在药物作用下其mRNA表达水平变化
细胞经药物作用后TRIzol法提取总 RNA。并以 SYBR 绿色荧光检测试剂盒进行 Real-time PCR 分析。
4、western blot 观察该受体蛋白蛋白水平表达变化
