重组人Bikunin在毕赤酵母中的表达和纯化课题性质 radic;基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）一、研究背景Bikunin，一种硫酸软骨素蛋白聚糖，存在于血液，尿液，羊水和脑脊髓液中，以其抗炎和抗蛋白水解作用而著称[1]。
Bikunin作为一种重要的蛋白聚糖，已经广泛用于临床，也被称为尿胰蛋白酶抑制剂（UTI）、乌司他丁等。
Bikunin含有两个类似牛胰腺胰蛋白酶抑制剂的Kunitz结构域，具有抑制血浆，尿液和羊水中丝氨酸蛋白酶的活性[2]。
Bikunin蛋白核心由alpha1-microglobulin/Bikunin precursor（alpha;1-微球蛋白/Bikunin前体，AMBP）基因编码的，基因序列由10个外显子和9个内含子组成，前六个外显子编码alpha;1-微球蛋白（alpha;1M），外显子7和10编码Bikunin的N端和C端序列，8和9分别编码Bikunin结构中的两个Kunitz型结构域[3]。
Bikunin由147个氨基酸组成，总分子量大小为25 kD左右，包括16 kD的多肽、7 kD硫酸软骨素（Chondroitin sulphate, CS）和2 kD的N-糖链[4]，其中硫酸软骨素糖链连接在第10位丝氨酸（Ser）上，N-糖链连接在45位天冬酰胺（Asn）处[5]。
CS链由12-18个二糖重复单元组成，包括葡萄糖醛酸（GlcA）和N-乙酰半乳糖胺（GalNAc），通过四个单糖（木糖-半乳糖-半乳糖-葡萄糖醛酸）连接到Bikunin的丝氨酸上。
平均而言，大约25％的GalNAc 4位被硫酸化（图1）。
Bikunin的两个Kunitz型结构域紧密包裹在一起，中间通过大约60的旋转相连，且两个结构域之间存在相互作用[6]。
图1 Bikunin结构示意图[7]Bikunin在肝脏中合成，由肾脏代谢后随尿液排出。
研究发现，Bikunin具有多种蛋白酶抑制活性，包括胰蛋白酶、凝血酶、糜蛋白酶、激肽释放酶、纤溶酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶等[8]。
