FOLR1蛋白表达和纯化工艺研究
开题报告
一、选题的意义与目的
(1)选题目的
利用基因重组技术，将已获得的FOLR1基因片段，经酶切后克隆到多种不同的蛋白表达载体，并进行双酶切及测序鉴定。挑选合适的蛋白表达载体与异源宿主，将测序正确的重组质粒转入感受态表达菌株或进行细胞转染，加入诱导剂，利用异源宿主自身的表达调控元件使该段基因得到有效表达。同时，利用表达载体上带有的标签对所得蛋白进行分离及纯化，并对纯化所得的蛋白的基本功能进行测定，测试其能否满足基础科研需求。本课题的目的在于从多种表达体系中筛选出表达量高的表达体系，并探索可行的分离纯化方案，力求得到纯度高，结构性质稳定的FOLR1蛋白，以便后续能进行大量表达纯化，为以FOLR1为靶点的癌症筛查诊断试剂及相应的靶向治疗药物的研发提供条件。
拟解决的主要问题：FOLR1表达方法与条件的优化、FOLR1的分离与纯化，蛋白性能检测方法的探究。
(2)选题意义
叶酸受体1(Folate receptor alpha，FOLR1)又称叶酸受体 alpha;、叶酸结合蛋白(FBP)，是叶酸受体(Folate receptors，FR)家族的一员，其由257个氨基酸构成，分子量在38~40kDa之间。已知叶酸在DNA的合成与修复、细胞增殖与生存的代谢过程中起到重要作用，成熟的FOLR1是一种N-糖基化蛋白，通过糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定到细胞膜表面，可与5-甲基四氢叶酸及游离叶酸特异结合，并且通过受体介导的胞吞机制将叶酸及其衍生物高效、特异的载入细胞[1]。
FOLR1主要在上皮细胞中表达，在正常组织中的表达局限于肾，肺，肠等。而在多种恶性肿瘤组织中过度表达[2]，如肝癌、肾癌、胰腺癌、大肠癌、鼻咽癌、乳腺癌、卵巢癌及宫颈癌等，已有研究证实FOLR1表达程度与部分恶性肿瘤的分化程度成正相关性[3]。由于FOLR1可以从细胞膜表面脱落，以可溶性形式存在于血液等各种人体分泌物中[4]，因此检测体液中可溶性FOLR1水平可以方便、快捷地预测局部肿瘤FOLR1的表达情况[5]，FOLR1正成为预测癌症发生发展的新型肿瘤分子标志物。目前，已有学者利用叶酸与其受体亲和力高、自身性质稳定、免疫原性低、分子量相对较小等优点，在小鼠身上实现了对部分恶性肿瘤的靶向诊断和治疗[6]。如今，很多化学、生物的药物已成功地包载入叶酸，加快其在叶酸受体阳性肿瘤细胞的转运，以提高对疾病的疗效，减少副反应。
