一、国内外的发展及立题依据
磷脂广泛存在于自然界的动植物和微生物中，是含有磷酸和含氮碱的类脂化合物，参与构成生物膜系统，是生命基础物质。磷脂主要包括甘油磷脂和鞘磷脂，其中，甘油磷脂包括卵磷脂、肌醇磷脂、脑磷脂、缩醛磷脂、心磷脂等。
磷脂是两亲性物质。其中脂肪酸、神经氨基醇的长碳链构成疏水尾部，磷酸酯部分构成亲水头部。在脂质存在下，磷脂分子以单分子层的形式分布在水/油界面，成为沟通油水两相的乳化剂。磷脂的HLB 值在4~10 ，不同磷脂间差别较大，应视脂质选择合适的磷脂为乳化剂。磷脂在水中的CMC值极低，大于该值则自发形成双分子层囊泡。
天然磷脂作为保健品，具有增殖作用、活化细胞等功能，常用来保护肝脏、增强记忆力和预防心血管疾病，并且是食品和脂肪乳注射液的优良乳化剂。但是，天然磷脂是混合物，含有大量不饱和键,对氧、温度和光敏感，易被氧化生成醛、酮、自由基等物质；磷脂分子结构中的酯键在水性介质中可发生水解，产物为脂肪酸、溶血磷脂等物质，在酸、碱条件下水解强烈，高温情况下反应加剧，因此，不适合作为药用辅料。相比之下，合成磷脂纯度高，稳定性好，利于质量控制；物理状态良好，利于工艺操作；应用于对脂质要求高的特殊载药体系脂质体、复合物、脂微球等，在药用辅料的应用中有较高的价值。已上市的一些脂质体制剂如表1[1-2]：
表1：已上市脂质体制剂
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Product |
Phospholipids |
Drug |
Year approved |
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Ambisome |
HSPE and DSPE |
Amphotericin B |
1990(Europe) |
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Doxil |
HSPE and DSPE-PEG2000 |
Doxorubicin |
1997(USA),2000 |
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DaunoXome |
DSPE |
Daunorubicin |
1995,1999,2003,2007 |
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Myocet |
EPC |
Doxorub cin |
1996(Europe) |
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DepoDur |
DOPC and DPPG |
Morphine sulfate |
1996(USA) |
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DepoCyt |
DOPC and DPPG |
Cytosine |
2000(Europe) |
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Lipo-Dox |
DSPC and DSPE-PEG2000 |
Doxorubicin |
2001(TaiWan) |
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Marqibo |
ESM |
Vincristine |
2012(USA) |
药品质量标准是药品的纯度、成分含量、组分、生物有效性、疗效、毒副作用、热原度、无菌度、物理化学性质以及杂质的综合表现；在生产中，依据质量标准保证药物在使用时安全、有效、合理；药品质量的优劣，直接关系到用药者的健康和生命安危；质量标准也是企业在生产、供应、使用和管理各环节保证药品质量的依据。因此，起草科学、合理、规范的质量标准在药品研发和生产中是极其重要的。
中国药典2015版[3]将药用辅料独立成册，编纂到药典第四部中，提高对辅料的质量要求、规范药用辅料的质量控制。磷脂是一种广泛使用的药用辅料，种类繁多，在中国药典2015版[3]中只收录了对大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂的质量标准，其中，含量测定主要是通过正相HPLC法，由于磷脂的紫外吸收波长较低（205nm），处于紫外吸收波长的末端，容易受多种因素的干扰，紫外检测器不适用。因此，HPLC-ELSD在磷脂的分析中具有较为广泛的应用[4]。目前，文献中对磷脂辅料的质量控制主要着重于有关物质的检查和含量测定这两个方面。磷脂的分析检测技术较为复杂，主要有TLC法和HPLC法[5]。TLC法主要用于磷脂的关物质的限度检查[6]。因此，本课题主要采用TLC和HPLC进行质量研究，以保证药物在使用时安全、有效、合理，质量稳定可控。
二、拟研究和解决的问题：
磷脂作为药用辅料历经三代，分别是：一代天然磷脂，二代合成磷脂，三代衍生化磷脂。
上世纪初，为解决病人的肠外营养供给问题，把脂肪安全的注射到血液中，科学家尝试了很多办法。首先需要将脂肪做成O/W的乳剂以使人体耐受，起初用表面活性剂作为乳化剂，具有很好的乳化效果，但因其具有细胞毒性，都没有成功，直到蛋黄卵磷脂用作脂肪乳乳化剂。这也是注射用磷脂高端辅料规模化应用的起始。至今，蛋黄卵磷脂仍是脂肪乳注射液最安全的乳化剂。随着载药脂肪乳剂的发展，催生出了高纯度蛋黄卵磷脂（PCgt;98%）的出现。高纯蛋黄卵磷脂不仅在载药乳剂中使用，还可以在脂质体中使用，尤其在合成磷脂供应不足的情况下成为许多脂质体科研工作者的首选脂质体膜材。表2[7]为已上市的静脉注射乳。
表2[7]：已上市的静脉注射乳
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Product |
Drug |
Market |
Emusifier |
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Cleviprex |
Clevidipine Butyrate |
USA |
EP |
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Diazemuls |
Diazepam |
Europe, Canada, Australia |
EP |
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Diazepam-Lipuro |
Diazepam |
Europe, Cana Australia |
EL |
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Diprivan |
Propofol |
Worldwide |
EL |
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Etomidat-Lipuro |
Etomidate |
Germany |
EL |
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Fluosol-DA |
Perfluorodecalin Perfluotripropylamine |
Worldwide |
EP and Pluronic F68 |
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Liple |
Alprostadil(PEG1) |
Japan |
EP |
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Limethason |
Dexamethaone Palmitate |
Japan, Germany |
EL |
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Lipo-NSAID |
Flurbiprofen axetil |
Japan |
EL |
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Stesolid |
Diazepam |
Europe |
EP |
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Vitalipid |
Vitamins A,D2,E,K1 |
Europe |
EL |
|
EL:egg lecithin EP: egg phospholipid |
然而，天然磷脂作为脂质体膜材受到很大限制，而且不同类型脂质体对磷脂理化性质要求均不同，因此，二代合成磷脂逐渐出现在高端辅料市场，并且用量逐年加大，主要包括氢化磷脂和全合成磷脂。相对天然磷脂，合成磷脂纯度高，种类繁多，合成产量小，价格昂贵，用于对磷脂要求高的新型药物，如磷脂复合物、脂质纳米粒、新一代超声微泡、磷脂胶束体系等的特殊载药体系，每个合成磷脂的市场化都与新制剂的上市密切相关。
三代衍生化磷脂衍生化磷脂应用于脂质体，通过PEG衍生化磷脂，影响药物的动力学特征，包括：延长半衰期、降低清除率，从而使长循环得以实现。长循环和主动靶向是制剂发展的方向，长循环通过PEG衍生化实现，主动靶向通过免疫因子实现。PEG衍生化磷脂还可用于所有需要增强长循环特性或免疫特性纳米粒。研究表明，MPEG-DSPE胶束是一种很有前途的药物输送系统治疗淋巴结转移[8]。
辅料的发展从来都是由制剂需求所推动的，目前，高端林芝辅料主要应用于脂质体、静脉注射脂肪乳剂及药物磷脂复合物等药物传递系统中[9]。随着我国脂质体的开发，合成磷脂的需求也越来越大。但是，目前我国高端磷脂主要依赖进口，且进口注册批文只有三个（见表3）。在以后的发展中，磷脂的地位会越来越高。因此，我们的课题将会对以后磷脂的质量标准建立起到一定的作用。
表3：我国高端磷脂进口注册批文
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磷脂 |
批文 |
应用产品 |
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HSPC |
F20090004 |
长循环阿霉素脂质体DOXIL,两性霉素B脂质体AmBisome |
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DSPG-Na |
F20120011 |
两性霉素B脂质体AmBisome |
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MPEG2000-DSPE |
F20090036 |
长循环阿霉素脂质体DOXIL |
三、研究内容及方法
本课题主要对培化磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamine Pegol,DSPE-MPEG2000)进行质量研究。
DSPE-MPEG2000DSPE-MPEG 是DSPE（二硬脂酰磷脂酰乙醇胺）的PEG（聚乙二醇）化衍生物，因聚乙二醇末端采用了甲氧基封端，使PEG 部分失活不能继续反应，因此称为MPEG。当PEG 分子量为2000时，DSPE-MPEG又称为DSPE-MPEG2000。DSPE-MPEG2000的合成原料为DSPE和MPEG，可能会由于未反应完全而引入到产品中；另外，DSPE-MPEG2000是甘油磷脂，在合成及储藏的过程中酯键容易发生水解，生成溶血磷脂酰乙醇胺和脂肪酸。因此，DSPE-MPEG2000需要检查的有关物质主要有大豆磷脂酰乙醇胺、脂肪酸、溶血磷脂酰乙醇胺以及MPEG。同时，DSPE-MPEG2000在合成过程中使用了丙酮、甲醇、甲苯。由于在合成过程中可能无法将其完全去除，因此，需对DSPE-MPEG2000的这几种残留溶剂进行检查,并根据每种残留溶剂的允许日接触量规定其限度。
本课题主要利用TLC、GC和HPLC这三种方法对培化磷脂酰乙醇胺的质量进行评价。TLC主要用于DSPE-MPEG2000的鉴别以及有关物质的限度检查；刘亚英等[10]对DSPE-MPEG中的正己烷、异丙醚、丙酮、四氢呋喃、甲醇、异丙醇、二氯甲烷、三氯乙烯、乙腈、三氯甲烷、二噁烷11种溶剂以DMF为溶剂用顶空气相色谱法进行检测。因此，可以初定用顶空气相色谱法对DSPE-MPEG2000的残留溶剂进行检测，而具体选用的溶剂、样品的处理方式、及气相条件需进一步考察；HPLC用于DSPE-MPEG2000的定量分析。本课题将初步建立DSPE-MPEG2000有关物质检查、残留溶剂检查和含量测定的方法，并对其进行方法学考察，最终确立磷脂辅料的质量研究方法。
DSPE-MPEG2000有关物质检查的方法学考察项目主要有：检测限、耐用性和专属性。
DSPE-MPEG2000残留溶剂检查的方法学考察项目主要有：专属性、定量限、检测限、线性、溶液稳定性、进样精密度及回收率。
DSPE-MPEG2000含量测定的方法学考察项目主要有：重复性、中间精密度、进样精密度、线性及溶液稳定性。
四、论文课题研究进度安排
2016.02.22----2016.03.11 确定选题，查阅文献。
2016.03.15----2016.03.24 撰写开题报告。
2016.03.25----2016.04.05 进行调查、收集资料、进行分析设计。
2016.04.05----2016.05.20 设计系统原型，并提交论文初稿。
2016.06.01前 修改论文，完善系统
2016.06.08前 提交正式毕业设计以及相关成果，并进行论文答辩准备。
五、参考文献：
[1] Hann IM, Prentice HG. Lipid-based amphotericin B: a review of the last 10 years of use[J]. Int J Antimicrob Agents, 2001, 17 (3) : 161-169.
[2] Allen TM, Cullis PR. Liposomal drug delivery systems: from concept to clinical applications[J]. Adv Drug Deliv Rev, 2013, 65 (1) : 36-48.
[3] 中华人民共和国药典委员会. 中国药典[M]. 北京：中国医药科技出版社，2015.
[4] 刘亚英，梁敏，吴立红，张素娟. 培化磷脂酰乙醇胺中有机残留溶剂的顶空毛细管气相色谱法测定[J]. 中国医药工业杂志. 2011, 42 (7) : 535-536.
[5] 张颖颖，杨亦文，吴彩娟，任其龙*. 磷脂分析检测方法的研究进展[J]. 中国医药工业杂志. 2006, 37 (1) : 58-62.
[6] 赵荣生，侯新朴，严宝霞. 脂质体载体材料卵磷脂的制备及质量标准研究[J]. 中国现代应用药学杂志. 2001, 18 (1) : 39-41.
[7] Hippalgaonkar K, Majumdar S, Kansara V. Injectable lipid emulsions-dadvancements, opportunities and challenges.AAPS[J]. PharmSciTech, 2010, 11 (4) : 1526-1540.
[8] Xue Lia, Qing Donga, etc. MPEG-DSPE polymeric micelle for translymphatic chemotherapy of lymph node metastasis[J]. International journal of pharmaceutics, 2015, 487 (1-2) : 8-16.
[9] 陈闯，王思玲，苏德森. 磷脂药物制剂研究进展[J]. 中国生化药物杂志. 2003, 24 (2) : 98-101.
[10] 刘亚英，梁敏，吴立红，张素娟. 培化磷脂酰乙醇胺中有机残留溶剂的顶空毛细管气相色谱法测定[J]. 中国医药工业杂志. 2011, 42 (7) : 535-536.
一、国内外的发展及立题依据
磷脂广泛存在于自然界的动植物和微生物中，是含有磷酸和含氮碱的类脂化合物，参与构成生物膜系统，是生命基础物质。磷脂主要包括甘油磷脂和鞘磷脂，其中，甘油磷脂包括卵磷脂、肌醇磷脂、脑磷脂、缩醛磷脂、心磷脂等。
磷脂是两亲性物质。其中脂肪酸、神经氨基醇的长碳链构成疏水尾部，磷酸酯部分构成亲水头部。在脂质存在下，磷脂分子以单分子层的形式分布在水/油界面，成为沟通油水两相的乳化剂。磷脂的HLB 值在4~10 ，不同磷脂间差别较大，应视脂质选择合适的磷脂为乳化剂。磷脂在水中的CMC值极低，大于该值则自发形成双分子层囊泡。
天然磷脂作为保健品，具有增殖作用、活化细胞等功能，常用来保护肝脏、增强记忆力和预防心血管疾病，并且是食品和脂肪乳注射液的优良乳化剂。但是，天然磷脂是混合物，含有大量不饱和键,对氧、温度和光敏感，易被氧化生成醛、酮、自由基等物质；磷脂分子结构中的酯键在水性介质中可发生水解，产物为脂肪酸、溶血磷脂等物质，在酸、碱条件下水解强烈，高温情况下反应加剧，因此，不适合作为药用辅料。相比之下，合成磷脂纯度高，稳定性好，利于质量控制；物理状态良好，利于工艺操作；应用于对脂质要求高的特殊载药体系脂质体、复合物、脂微球等，在药用辅料的应用中有较高的价值。已上市的一些脂质体制剂如表1[1-2]：
表1：已上市脂质体制剂
