课题名称 Aom0319抗血栓的形成及抗凝作用的研究课题性质 radic; 基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究实验目的:研究Aom0319抗血栓的形成及抗凝作用。
课题背景:血栓性疾病是由于血液凝固系统和多种抗凝机制动态平衡失调造成的。
血栓形成后,血流受阻,易累及全身组织器官[ ]。
近年来,随着血栓栓塞性疾病发病率和死亡率增加,开发更为有效的治疗血栓性疾病的药物已成为临床的迫切需要。
目前抗血栓药作用机制主要是抗凝血、抗血小板和溶栓,三者有其各自的药理特点,然而传统抗血栓药存在着自发性出血、选择性低和药效一般等因素,探寻新型抗血栓药物受到越来越多的关注。
本课题用多种方法诱导血栓模型,研究Aom0319体内外抗血栓的形成及抗凝作用,为新药开发提供实验依据。
实验动物:SD大鼠,200~220g,70只,雌雄各半,SPF级;ICR小鼠,18-20g,70只,雌雄各半。
实验过程:1. Aom0319对凝血因子IIa、Xa、XIIa体外抑制活性的影响以PBS为反应体系,将受试药Aom0319配制成一定梯度浓度(0 nM、0.01 nM、0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM、500 nM、1 uM、5 uM、10 uM、100 uM)。
在96孔板内,加入活性因子II(FIIa)、活性因子X(FXa)、活性因子XII(FXIIa)标准品与梯度浓度的Aom0319于37℃温育30 min,然后加入底物溶液(1000 uM、500 uM、100 uM、50 uM、10 uM、1 uM、0.1 uM、0 uM),开始反应。
反应开始后用酶标仪测量反应体系在405 nm处的吸光度,每1 min测一次,持续至吸光度无明显变化。
