课题目的:掌握蛋白质唾液酸检测常用的间苯二酚显色法,开发优化并验证唾液酸检测的HPLC方法,达到使用该方法检测的重组蛋白质药物唾液酸含量的目的。
研究内容:重组人凝血酶和重组人促甲状腺激素生产中间品和原液中唾液酸含量的测定。
研究手段:紫外可见分光光度法、HPLC主要成果形式:实验结果报告、论文的书写、企业相关研究工作的推进进程拟研究的问题:不同检测方法的优缺点比较以及唾液酸的不同存在形式跟检测方法之间的联系及适用性主要参考文献:详见文献综述本课程工作进度的安排:前期着重于对不同实验方法的研究,搜集资料,学习并尝试操作不同分析仪器的使用和操作流程;中期针对本实验所需求的检测手段开展相关研究实验;后期进行论文报告的书写以及实验工作的总结。
文献综述:1. 燕窝中唾液酸含量测定方法的研究摘 要: 目的 研究燕窝中唾液酸含量的测定方法,制定燕窝的质量标准。
方法 燕窝经过磷酸水解, 其中的唾 液酸(即 N-乙酰神经氨酸)从唾液酸糖蛋白的结合状态游离出来 ,用高效液相色谱法进行检测, 以唾液酸含量作为 评价指标,通过三因素三水平正交试验, 优选出最佳的水解条件。
结果 唾液酸浓度在 20~ 330 mu; g/mL 范围内线性 良好,平均回收率为 98. 4%, RSD 为 1. 02%(n=6)。
结论 此法具有稳定性及重复性好、灵敏度高、操作简单等特 点,能够准确地检测出燕窝中的唾液酸含量。
2. 高效液相色谱法测定母乳中唾液酸含量摘 要:建立荧光高效液相色谱(fluorescence detector-high performance liquid chromatography,HPLC-FLD)测定母乳中 唾液酸N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)和N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolyl neuraminic acid,Neu5Gc) 含量的分析方法。
利用酸水解法释放出母乳中的唾液酸,以4,5- 亚甲二氧基-1,2- 邻苯二胺盐(4,5-methylenedioxy-1, 2-phenylenediamine dihydrochloride,DMB)为衍生化试剂,50℃避光衍生150min,采用荧光高效液相色谱仪检测。
