开题报告
- 拟研究或解决的问题
眼内新生血管多见于角膜、脉络膜及视网膜病变，是导致非肿瘤性眼部疾病失明的主要原因。由于新生血管内皮细胞形态异常、间隙增大，易引起出血、渗出和增殖等一系列病理性改变，最终导致视力严重下降，甚至失明，是眼科领域研究的重要难点[1]。其中，视网膜静脉阻塞（RVO）是眼科临床常见的难治性眼底血管性病变，其发生率占眼底病变的第二位[2]。毕业设计所在实验室早期已初步对一种活血化瘀类中药的活性部位进行探索，其针对视网膜静脉阻塞药效显著、安全性高，具有极好的开发前景。为了进一步拓展眼部血管性疾病眼用制剂的应用，本毕业设计拟用动物模型，对市场上多种（暂定4种）活血化瘀类中药注射液活性进行初步筛选，探索其对视网膜静脉阻塞的药效，为眼部血管性疾病相关研究提供参考。
- 采用的研究手段
新西兰白兔适应性喂养一星期，经复方托吡卡胺滴眼液扩瞳，盐酸利多卡因注射液麻醉，静脉注射虎红钠，再经532 nm 激光光凝造模。24 h 后，实验组右眼给活血化淤中药注射液，左眼给生理盐水，每日三次，每次50 micro;l ，给药一星期后，空气栓塞处死，取眼球，将实验组、空白对照组分别作平行于眼球矢状面的厚度为4 micro;m 的连续切片，光镜下观察视网膜静脉的形态。
- 文献综述
1. 简介
视网膜静脉阻塞分为视网膜中央静脉阻塞（BRVO）和视网膜分支静脉阻塞（CRVO)。引起视网膜静脉阻塞的原因有以下三个方面：（1）血管外的压迫：多见于视网膜动静脉交叉处的动脉硬化压迫同一动静鞘内的视网膜静脉，最终导致静脉阻塞；（2）静脉血流瘀滞：多见于视网膜动脉灌注压不足或眼压增高及血液粘滞度增高的患者，常发生于颈动脉供血不足、大量失血、低眼压、青光眼等病；（3）静脉血管内壁的损害：常由于视网膜血管所致；但其具体成因及发病机制仍不十分清楚[3]。
2.视网膜静脉阻塞造模
随着对视网膜静脉阻塞的重视，国内外学者制作数种动物模型，进行病因、病理学和治疗学上的研究。近年来，已有部分研究者通过眼底结扎法、光化学诱导法、激光光凝封闭视网膜静脉法、经玻璃体内电凝视网膜静脉法、凝血酶静脉滴注法等[4]成功造模，此外还有使用病原微生物感染视网膜静脉血管等方法。（1）眼底结扎法：是最早的手术方法，直接眼底手术结扎主干静脉[5]。此方式对于施术者的技巧要求较高，同时因手术创伤较大，现在已经基本淘汰，但随着玻璃体切割术的成熟，此造模方法的改进方式又重新被人们所重视。（2）激光光凝封闭视网膜静脉法：卢海等[6]选健康纯种新西兰白兔，常规眼部，排除内外眼病。麻醉动物。先拍摄眼底无赤光像，然后从耳缘静脉注入3 ml 200 g/L 的荧光素钠，进行荧光素眼底血管造影。放置三面镜，以氩离子激光封闭视盘两侧的视网膜静脉（光斑大小200 micro;m ,功率700~1000 mW ，时间0.5 s ）。封闭视网膜静脉后拍摄眼底无赤光像，并再行 FFA 以证实静脉是否完全封闭。如视网膜未被完全阻断，可再次补作数点激光光凝。但其在造模中形成的模型再通率高，并不稳定。（3）光化学诱导法：王帅[7]等用生理盐水配制质量浓度为50 mg/mL 的孟加拉红钠盐，经0.22 micro;m 无菌滤膜过滤，4 ℃ 避光保存。随机将青紫蓝兔分为 A、B 两组，每组8只，均设右眼为实验眼。经托吡卡胺滴眼液充分扩瞳后，氯胺酮50 mg/kg 和氯丙嗪25 mg/kg 混合液肌肉注射麻醉，右眼滴入爱尔卡因表面麻醉，放置角膜接触三面镜。经耳缘静脉一次性注射孟加拉红50 mg/kg ,距视盘边缘约1 mm 内选择视网膜主干，激光光凝 A、B 两组实验兔。 A 组激光能量150 mW 再光凝40点。两组均曝光0.5 s ，光斑大小100 micro;m 。光凝位置为单点光凝，光凝后15 min 行眼底荧光造影及眼底拍照，确认静脉阻塞。根据此方法可以制造出兔眼视网膜静脉阻塞模型，在增加光凝次数以后会出现视网膜动脉阻塞现象。以上方法中，激光光凝及光动力诱导法是目前应用最广泛的视网膜静脉阻塞的建模方法[8]。检验造模是否成功有眼底照相、眼底荧光血管造影（FFA）检查、光学显微镜检查等方法[9]。
3.活血化瘀中药注射液的选择
伴着中药化学的不断发展，逐步深入研究，中药活性部位广泛应用于眼科疾病，对眼部血管性疾病有明显药效。血栓通注射液是以三七的根精制提纯的药物活性物质，三七总皂苷配制而成的灭菌水溶液，属纯中药制剂，具有活血祛瘀、通脉活络、改善血液循环等作用，药理活性具有降低外周血管阻力、扩张血管、增强脑血流量、扩张冠状动脉、增强冠状动脉流量、抗凝、抗血栓作用[10]。近几年来，其在眼科用于治疗前方积血[11]、玻璃体积血[12]，疗效较好。因此，本毕业设计根据视网膜静脉阻塞的第二方面原因推测，活血化淤类中药注射液对治疗 RVO 有效存在可能。
目前，根据活血化瘀的功效，暂选4种市场上的注射液，分别为吉林四长丹参川芎嗪注射液、大理药业醒脑静注射液、牡丹江友博药业疏血通注射液及浙江永宁注射用红花黄色素。（1）丹参川芎嗪注射液：主要成分为丹参、盐酸川芎嗪，丹参具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈之功效。用于闭塞性脑血管疾病，如脑供血不全、脑血栓形成等；（2）醒脑静注射液：主要成分为人工麝香、郁金、冰片、栀子，4味药经水蒸气蒸馏提取而制成的中药注射剂，具有清热解毒、凉血活血、开窍醒神之功效，广泛用于急性中毒、脑血管疾病、冠心病、脑炎等疾病的治疗，疗效突出[13]；（3）疏血通注射液：主要成分为水蛭、地龙，具有活血化瘀、通经活络之功效。水蛭的有效成分为水蛭素、肝素和抗血栓素，地龙的有效成分为蚓激酶，二者组合能抑制凝血酶活性[14]（4）注射用红花黄色素：中药红花具有活血化瘀、通脉止痛之功效，红花黄色素是红花的主要效应物质，为多种黄酮类物质的混合物[15]。
