实时荧光定量PCR技术在腺相关病毒滴度测定中的应用
一、研究背景：
1.腺相关病毒
腺病毒相关病毒(AAV)最早是在20世纪60年代中期从实验室腺病毒(AdV)制剂中发现的，并且很快就在人体组织中发现。腺相关病毒是动物病毒中最小，基因结构最简单的一类单链 DNA 缺陷病毒。单纯的腺相关病毒并不发生毒性感染，只有在与其他辅助病毒发生共同感染时才能产生作用。由于安全性好、宿主范围广、免疫原性低等特点，腺相关病毒被广泛应用于基因表达载体的构建及基因治疗。[1]
现如今，重组AAV (rAAV) 已经成为体内基因治疗递送的主要平台。第一种rAAV基因治疗产品是uniQure公司的alipogene tiparvovec (Glybera) ，于2012年被欧洲药品管理局(EMA) 批准用于治疗脂蛋白脂肪酶缺乏症；2018年，FDA批准了voretigene neparvovec-rzyl (Luxturna)，于治疗遗传性视网膜疾病，这是第一个获得美国许可的rAAV基因疗法。[2]
基因疗法代表了治愈人类疾病的前沿之一。AAV载体的治疗范围很广，可用于中枢神经系统、心脏、肝脏、视网膜等疾病的治疗。目前使用AAV载体进行临床试验的呈指数增长，随着AAV领域的不断扩大，将继续推动基因治疗药物的开发。
2.病毒滴度的定量测定方法
rAAV基因药物临床研究历经16年，其有效性和安全性已得到分证实，但其准确、可靠的定量测定标准方法仍未建立。目前采用的rAAV滴度测定方法按照原理可分为生物测定和物理测定两大类。生物测定主要评估载体传递转基因的能力，包括转导和感染滴度测定。物理测定则基于其物理性质，可细分为病毒颗粒和基因组滴度测定。[3]
2.1生物测定方法
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