拟研究或解决的问题：对HA-PL纳米粒的体外抗肿瘤活性进行评价
研究手段：
- 体外药物释放研究：透析袋法进行体外药物释放研究。将样品填充到透析袋中，并浸入一定体积的溶解介质中，以一定的速度搅拌以进行研究。每次取样后用相同体积的新鲜培养基代替采用高效液相色谱法测定释放药物浓度。
- 细胞培养：细胞在适当的培养基中培养，并在37 °c 时加入营养物质和抗生素，在均匀供应5% 二氧化碳的湿培养箱中培养。
- 体外细胞毒性的测定：MTT（3-（4，5-二甲基二氮杂-2-基）-2，5-二苯基四唑溴化物）试验用于检测HA-PL纳米粒对细胞系的毒性。在96孔培养板上，并在37°C的培养箱中放置24小时以保持细胞粘附，然后用不同浓度的HA-PL纳米粒处理。 24小时后，加入一定浓度MTT溶液，并将细胞在37℃下再孵育4小时。最后，用100mu;l二甲基亚砜（DMSO）代替培养基，并使用酶标仪测量吸收率。未被处理的细胞作为对照具有100％的生存力。使用Prism6软件计算IC50水平（半抑制浓度）。
- 细胞凋亡的检查和细胞周期分析：
4.1测定HA-PL纳米粒对细胞束的凋亡作用：细胞培养在含有一定待测物质浓度的6-well板块上。采用凋亡检测试剂盒，利用流式细胞仪对早期和晚期凋亡细胞进行分析，并使用细胞凋亡分析软件对数据进行分析。
4.2通过流式细胞术测定胶束对细胞周期进程的影响：将细胞在6孔板中孵育过夜，并用待测物质处理48小时。然后，收集细胞并在4℃下用70％乙醇固定过夜。接下来，在室温下在黑暗的房间中加入一定量细胞周期试剂，持续30分钟。使用流式细胞仪系统分析样品，并使用分析软件确定数据。
- 体外迁移和侵袭实验：通过细胞划痕试验评估了用各种媒介物处理的肿瘤细胞的迁移。将细胞接种到6孔板，并使其形成一层融合的单层。在每个孔的中心产生均匀的划痕，并用PBS清洗两次，以除去漂浮的细胞。在产生划痕后使用倒置显微镜对细胞拍照。通过确定两个边缘之间的距离来测量伤口大小。进行Transwell入侵测定，简而言之，将细胞束接种到涂有Matrigel溶液的上腔室中，并将含有10％FBS的DMEM（600mu;L）添加到下腔室中。与HA-PL纳米制剂孵育24小时后，用棉签除去非侵袭性细胞，然后将附着在膜下表面的浸润性细胞固定用4％的多聚甲醛，用0.1％的结晶紫染料染色，并用PBS洗涤。最后，观察细胞并在倒置显微镜下计数。
- 统计分析：所有实验一式三份进行，所有数据通过数据分析软件进行分析。使用单因素方差分析确定非参数统计的统计显着性。数据以均值plusmn;标准差（SD）表示，显着性设置为Ple;0.05。
文献综述：
HA-PL纳米粒的体外抗肿瘤活性评价
摘要：PL属于非甾体抗炎药（NSAIDs），主要用于缓解轻至中度疼痛，NSAIDs也被证明有预防已经抑制肿瘤的作用。HA由于其特有的优势而被广泛用于抗癌药物递送中，属于主动靶向。纳米粒子由于其特有的分子尺寸大小而对肿瘤有一定的靶向性，属于被动靶向。本文通过文献调研，主要对PL的抗癌作用、HA在抗癌药物的递送中发挥的作用,以及纳米粒对肿瘤组织的被动靶向性进行综述。
Abstract：PL is a non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAIDs) that is mainly used to relieve mild to moderate pain. NSAIDs have also been shown to prevent tumors that have been inhibited. HA is widely used in the delivery of anticancer drugs due to its unique advantages, which is an active aggregation. Nanoparticles are complementary to tumors due to their unique molecular size, which is a passive substitution. Through the literature survey, the anticancer effect of PL, the role of HA in the delivery of anticancer drugs, and the passive transformation of tumor tissues by nano-formulations are summarized.
关键词：PL，HA，抗肿瘤，纳米粒
Key words：PL, HA, anti-tumor, nanoparticles
