开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
1课题研究的目的和意义
蜂胶是蜜蜂从植物芽孢或树干上采集的树脂,将其混入上颚腺、蜡腺的分泌物加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体化合物.因其产量低,功效高,被科学家誉为紫色黄金.同时,蜂胶含有丰富的对人体有重要作用的生物活性物质包括30多种黄酮类化合物、20多种氨基酸、多种维生素和活性酶类,34种人体所必需的微量元素以及多糖类,因此对人体有很多有益的功效,可增强免疫力活化细胞去除毒素抗炎抗过敏护肝降糖降脂抗衰老抑制肿瘤等.但在蜜蜂养殖过程中,蜜蜂患病不可避免,蜂农往往添加抗生素用于防治蜜蜂疾病,早在1951年土霉素就开始用于治疗美洲幼虫腐臭病，而后的几十年人们就普遍使用土霉素等四环素族药物来防治美洲幼虫腐臭病。抗生素的大量使用及休药期不够容易造成抗生素在蜂产品中残留。前几年我国蜂胶曾被国外检出有重金属和药物残留，因此, 建立快速、灵敏、准确的药物残留的检测方法，对于控制出口蜂胶的质量具有重要意义。
2、课题研究方法和主要内容
四环素类抗生素具有广谱抗菌活性,不仅对革兰氏阳性,革兰氏阴性和支原体,甚至对立克次体和衣原体之类的微生物都有活性。常用的四环素类抗生素有四环素、土霉素、金霉素和强力霉素，因而可能造成蜂产品中四环素类药物的残留。世界上许多国家就蜂蜜中的抗生素残留均作了限量要求。目前为止,有许多种方法已经被报道用于检测蜂胶中残留的四环素类抗生素。主要方法有微生物分析法、薄层色谱法、免疫分析法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法。微生物分析法没有很好的灵敏度，存在交叉反应和周期较长的劣势，不能在实际生产中很好的应用。本研究综合考虑特异性、精密度、灵敏度等因素采用固相萃取HLB柱净化样品，液相色谱-质谱联用法测定蜂胶中四环素族药物的残留。
液相色谱-质谱联用是蜂产品中四环素类药物残留检测最常用的分析方法。2006年薛晓峰等人建立了液相色谱-质谱联用测定蜂王浆中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素等四环素族抗生素残留的方法，样品用0.1mol／L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取,经过HLB柱净化,然后采用LC-MS进行测定。本方法的加标回收率为65.0%～86.8%之间,相对标准偏差在5.53%～11.30%之间,对蜂王浆中土霉素、四环素的检出限小于10ng／g,金霉素、强力霉素的检出限小于20ng／g。目前关于蜂胶中四环素族药物残留的检测方法较少，本课题旨在采用液相色谱-质谱联用法同时检测蜂胶中四环素、土霉素、金霉素和强力霉素含量，建立检测方法，确定检测限。
三:课题研究技术途径
1.蜂胶中残留四环素族药物提取
由于蜂胶不溶于水,为了提取出其中的抗生素,首先需要采取合适的提取液进行提取。四环素族抗生素的提取方法因样品的不同需采取不同的提取液。常用的四环素族抗生素提取液有以下几种：
（1）进行牛羊肉中四环素族抗生素残留量检测时，由于牛羊肉中的基质较为复杂，脂肪、蛋白质的含量较高，可采取甲醇提取，用甲醇饱和的正己烷去除脂溶性杂质，用5％高氯酸沉淀蛋白质。
（2）污泥样品中四环素族抗生素提取可乙腈-水溶液超声萃取，高速冷冻离心后可得到提取液。提取液经HLB柱富集浓缩和NH2柱净化后可进行高效液相色谱-串联质谱测定。
