恩比普在动物实验的药用机理
1.选题依据和研究背景
脑血管疾病(cerebrovascular disease，CVD)是指由于各种脑血管病变所引起的脑部病变。脑卒中(stroke)则是指畸形起病、迅速出现局限性或弥漫性脑功能缺失征象的脑血管性临床事件。
脑血管病是导致人类死亡的三大疾病之一，在全球范围内，每年使460万人死亡，其中1/3在工业化国家，其余发生在发展中国家，患病和死亡主要在65岁以上的人群。日本是脑卒中发病率、死亡率最高的国家之一，脑血管病死亡率一直居死因之首。我国也是脑卒中死亡率高发地区，据估计居民现患脑血管病600万，每年新发生脑血管病130万人、死亡近100万人，在幸存者中约3/4的人留下偏瘫等后遗症状，部分病人丧失劳动能力和生活能力。
丁苯酞是治疗脑缺血等脑部疾病的一种疗效显著的药物,临床主要用于治疗轻、中度急性缺血性脑卒中等心脑血管疾病。近十多年来国内外大量实验证实丁苯酞可阻断缺血性脑卒中所致脑损伤的多个病理环节,具有较强的抗脑缺血作用、明显缩小大鼠局部脑缺血的梗塞面积、减轻脑水肿、改善脑能量代谢和缺血脑区的微循环和血流量、抑制神经细胞凋亡,以及抗脑血栓形成和抗血小板聚集等药理作用。
2.实验内容
恩比普的双重作用机制，一，重构微循环，增加缺血区灌注。二，保护线粒体，减少神经细胞的死亡。论文设计主要从重构微循环方面来进行动物实验，重构微循环主要通过保护血管结构完整，恢复血管管径，增加动脉血流速度和增加缺血区毛细血管数量。其次是保护线粒体，减少神经细胞死亡。，线粒体是细胞的能量加工厂，细胞所需的ATP绝大部分是由线粒体提供的。在缺血缺氧条件下，线粒体的结构和功能受到破坏，直接影响脑细胞的能量供应，引起脑细胞的死亡。因此维护线粒体的结构和功能可以有效地减少细胞死亡。在这方面，恩必普主要从4方面发挥作用。保护线粒体结构的完整，提高线粒体复合酶IV的活性，提高线粒体ATP酶的活性，维持线粒体膜的稳定性。
实验过程
主要通过大鼠验证上述药理机制。一，用自制环形银夹狭窄Ｓ－Ｄ大鼠的双侧肾动脉，复制成一种易卒中型肾血管性高血压大鼠模型（ＲＨＲＳＰ），然后给与恩比普和空白组治疗，七天后观察卒中大鼠的切片， HE（苏木精和伊红）染色后于100X显微镜下观察。二，原代培养的Wistar孕鼠皮质神经细胞，低糖低氧处理5小时，在处理的同时加入剂量分别为0、1、10、100mu;mol/L的阿司匹林和恩必普，5小时以后检测6-酮-PGF1alpha;/ TXB2比值。三，在大脑右中动脉阻断术后20分钟，给与恩比普治疗15分钟观察软脑膜微动脉血流速度。四，将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组和恩必普组。其中，假手术组仅进行颈部血管分离而不栓塞；模型对照组和恩必普组大鼠大脑右中动脉被阻断。恩必普组采用恩必普灌胃3天, 每次25mg/kg, 早晚各1次; 假手术组和模型对照组采用相应剂量的食用植物油灌胃3天。观察血管内皮生长因子含量变化。五，培养血管内皮细胞，将其分为3组：正常对照组，低氧低糖处理组，低氧低糖处理同时加入恩必普组。在处理3小时后，用荧光抗体特异性标记线粒体，观察其结构。六，选取原代培养的神经元细胞，进行低氧低氧处理，同时加入不同浓度的恩必普，观察线粒体复合酶IV活性的变化。七，大鼠缺血再灌注模型，先阻断大鼠大脑中动脉2小时，然后恢复血流，再灌注24小时。治疗组是在缺血前10分钟腹腔注射不同浓度恩必普，观察ATP酶的活性。八，对原代培养的大鼠神经元细胞进行低氧低糖处理，同时治疗组加入不同浓度的恩必普，观察膜电位的变化。
实验所需材料
