- 课题背景
Reg蛋白家族能够参与胰岛细胞的增殖,存活和再生。Reg3beta;的表达(胰腺炎相关蛋白)可以高度诱导实验性糖尿病和急性胰腺炎,但其确切作用机制尚不明确。通过基因敲除的研究,这种蛋白被证明能够促进细胞有丝分裂,促进细胞增殖,抗细胞凋亡,在肝脏和胰腺细胞中还能起到抗炎作用。[1]本课题拟建立实验研究胰岛特异性表达的Reg3beta;蛋白所诱导的促胰岛基因表达和对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠的保护,以及检测Reg3beta;是否能促进细胞生长或对抗实验性胰岛损伤。
- 研究内容及方法
1、重组Reg3beta;蛋白纯化样品的制备
1.1 包涵体形式表达重组Reg3beta;蛋白
1.2 物理化学破碎提取重组Reg3beta;蛋白
1.3 His亲和层析纯化
1.4 透析复性
2、重组Reg3beta;蛋白的定性和定量鉴定
2.1变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定
2.2免疫印迹法(Western Blot)对重组蛋白进行定性鉴定
3、重组Reg3beta;蛋白生物学活性的研究
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