本科生论文开题报告
大鼠离体肝灌流法探究大黄酸的肝损伤作用
- 选题依据
大黄酸是中药芦荟、大黄等的主要有效成分，属单蒽核类1,8-二羟基蒽醌衍生物，含2个羟基和1个羧基，极性较强，具有电化学氧化还原性质。 以往的药理学研究证明，大黄酸在抗肿瘤、抗菌、 抗病毒、降糖调脂、保肝抗纤维化等多方面具有活性，尤其在治疗骨关节炎、糖尿病肾病及协同抗肿瘤方面表现更加突出[1]，成为研究的热点之一。近年来，随着各种研究技术及方法的不断发展，对大黄酸的研究也更加深入，但对其肝肾毒性和致癌潜力以及毒性机制尚无明确定论。因此，研究大黄酸的肝损伤作用对新药研发的安全性具有非常重要的意义。
在药物毒物代谢和毒理学研究中，原代肝细胞培养、肝组织切片、肝灌流、肝微粒体制备物温孵和基因工程细胞模型等体外实验被广泛应用[2-3]。其中体外研究方法中的肝脏灌流模型在实验条件上与体内方法最接近，是一种与整体肝脏最具可比性的模型，并且近10年来随着化合物分析手段和检测手段的不断进步，离体肝脏灌流技术趋向简便易行，因此被广泛应用于外源性化合物代谢和肝毒性研究[4]。因此，本课题采用大鼠离体肝灌流模型探究大黄酸的肝损伤作用。
二、实验原理
本实验采用大鼠离体肝灌流模型，取灌流液测ALT、AST、LDH水平，并进行肝组织病理学检验以评价大黄酸是否具有肝损伤作用。
离体肝脏灌流最接近体内状态，保持了肝组织结构和功能的完整性，有完整的脉管系统，细胞间的相互作用及各种代谢酶的活性与体内一致，而且灌流状态下的肝脏有正常的摄取、转运、代谢、排泄和分泌功能；氧、营养物质和化合物可经正常的生理途径进入细胞，所以很大程度上克服了离体制备的诸如细胞间的联系遭到破坏、酶系处于异常分布状态以及细胞器因缺氧而受损等缺点[3]。其次,在肝灌流过程中可检查肝脏的蛋白质、糖、脂肪代谢以及排泄功能，测定来自肝细胞的酶，了解肝细胞损伤情况，灌流结束后可进行组织学观察。此外，灌流介质的成分和流速均可调节，可严格控制进入肝脏化学物的量，在灌流介质中可加入相对大量的受试物，解决了整体动物试验剂量过高的问题[5]。
在药物临床研究中，肝毒性的评价主要依靠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、血清天冬氨酸转氨酶(AST) 和乳酸脱氢酶(LDH) 等传统生物标志物联合病理组织学检查完成[6]。血清 ALT 作为肝细胞损伤标志，是目前应用范围最广的肝损伤黄金指标。2009年FDA再次将 ALT 确认为药物评价研究的主要生物标志物[7]；AST 敏感性和特异性较 ALT 低，但有时却可作为 ALT 的良好补充；AST 在心脏和肌肉内的普遍表达使其特异性降低 , 因而通常需与其他指标联合应用， ALT/ AST 值被认为可用于排除肝外干扰[8]；LDH 同工酶的分布具有明显的组织特异性，多作为肝细胞毒性体外检测的标准生物标志物[9]，以药后细胞泄漏到培养液中的LDH活性与全部细胞死亡后的LDH活性比值来衡量化学物的细胞毒性大小[10]。
- 实验材料
（一）设备材料：
