RNA结合蛋白RNPC1调控STARD13表达的初步探究课题性质 radic;基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究课题背景： 乳腺癌是如今在女性中发现最常见并且会导致患者死亡的癌症[1]，尽管诊断乳腺癌的方法一直在进步，但是乳腺癌对于女性仍旧是一个致命的疾病[2]，RNA结合蛋白RPBS是在基因层面上调控并且参与到乳腺癌过程中。
RNA结合蛋白RPBS在基因表达的翻译后过程中起到很重要的作用，不同的RBPS有着致癌或者抑癌的功能，RNPC1属于RBPS中的RNA识别元件家族，在人类癌症中，它可以通过改变mRNA的稳定性来调控靶基因的表达。
已有研究表明，RNPC1在乳腺癌中具有抑制肿瘤生长和迁移的作用[4]，然而其深层的分子机制尚未明确。
从已知的文献中，我们查到了RNPC1基因在染色体20q13上并且在不同的组织中表达成239个氨基酸的RNPC1a和RNPC1b[3]，其中RNPC1a可以结合并稳定mRNA p21、p73和HUR[3-6]，此外RNPC1还可以结合并稳定mRNA p63、MDM2、p53等[7-10]。
STARD13是一种对甾类化合物和蛋白相关的具有强烈调控作用的脂质转移蛋白质（由DLC1基因编码），有研究显示STARD13在各种癌症中有着重要的作用。
首先，它的过表达被证实与肝癌细胞生长与增殖的大量减少相关[13]，其次，与它密切相关的DLC2基因被证实在肺癌、胃癌、前列腺癌、肾癌等许多癌症中表达程度很低[12-13]，此外，已有的星形细胞瘤中的数据显示STARD13可能有着肿瘤抑制的作用[14]。
有的课题致力于确定STARD13在乳腺癌患者细胞中的表达水平和对细胞增殖的作用[15]，因此STARD13可能在乳腺癌细胞中发挥着必不可少的作用。
基于以上分析，猜测RNA结合蛋白RNPC1能通过稳定STARD13的表达从而抑制乳腺癌的转移。
实验步骤：一、构建RNPC1的表达质粒：根据RNPC1基因序列利用软件Primer5.0设计引物进行DNA聚合酶链式反应得到的DNA片段双酶切酶连 将其插入PEGFP-C3载体然后转化入大肠杆菌DH5alpha;感受态细胞中进行扩增，挑取单克隆，通过测序确认质粒构建成功。
二、转染试剂转染（六孔板）利用转染试剂TransitBrCa将表达质粒与空白质粒（对照实验）转染进入乳腺癌系细胞（MDA-MB-231） （1）细胞准备：每孔加2.5ml培养基，培养一天，细胞贴壁后密度为60%-80%，细胞换液，每孔加2ml新鲜培养基 （2）转染试剂的准备：将Trans-BrCa试剂开温至室温并轻微的涡旋，往1.5ml的EP管中加入250uL的双无培养基，加入1ug/ul的2.5ul质粒DNA，温和地吹匀，加入5ul的TransIT，温和地吹匀，室温培养15-30mins。
