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课题名称：氨基糖苷类药物测定方法及毒性效应器官的药代研究
课题解决的问题
氨基糖苷类抗生素的基本结构都是氨基环醇和氨基糖缩合而成的苷, 含氨基或其他碱性基团。这类药物具有明显的治疗药物监测指征,如治疗窗比较窄、耳肾毒性、患者个体间药代动力学差异较大等。在现有的检测方法中,细菌法准确性差、灵敏度低；高效液相色谱一紫外和荧光检测法不能直接测定；荧光偏振免疫测定法不能提供较新药物的试剂盒并且价格昂贵。故建立一个准确性好、灵敏度高、操作简便、能满足该类药物要求的方法是非常迫切和必要的。因此本课题拟采用LC-MS/MS建立生物样本中的氨基糖苷类抗生素浓度的测定方法，并对该类药物在毒性效应器官内的药代行为进行考证，从而为解释药物的靶器官毒性提供药代动力学的支持。
文献综述
氨基糖苷类抗生素历来被广泛应用于临床，是一类针对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的广谱抗生素[1]。氨基糖苷类抗生素在结构上是由两个或多个氨基搪和一个氨基环己醇通过苷键连接而成的[2]。但氨基糖苷类抗生素的耳毒性和肾毒性使其在临床应用中受到一定限制，在治疗中需要进行药物浓度的监测[3-6]。此类抗生素的体内含量的测定方法主要有生物学测定法, 免疫分析法, 高效液相色谱法,薄层色谱法和差示脉冲极谱法等。
微生物检定法(MA)以往是各国药典对氨基糖苷类抗生素的含量测定的方法。在临床药物检测和药代动力学研究中,微生物法被广泛用于血清或血浆中氨基糖苷类药物浓度水平的测定。此生物学测定法均应用含菌琼脂培养基测抑菌圈的直径作标准曲线, 如王尔健[7]算出血清中待测抗生素浓度。免疫分析法将分析方法与免疫原理相结合,进行超微量分析,具有特异性强、样品用量少、灵敏度高等优点。根据对抗原标记方法不同,可分为放射免疫法，酶免疫法,荧光免疫法，化学发光免疫法，浊度免疫分析法和毛细管电泳免疫分析法等[2]。如邓安平等人用化学发光免疫分析法测定血清中庆大霉素的含量[8]。
微生物效价法和免疫法属于非分离分析法，由于氨基糖苷类药物中各组分性质相近、化学结构相似,用上述非分离分析分析法进行含量测定时测得的是各组分的总含量,无法测得各组分及杂质的相对含量, 即选择性较差,所以色谱等分离分析法是氨基糖苷类抗生素药物定量分析方法发展的方向。薄层色谱法作为一种定性鉴别和质量控制的方法鉴别氨基糖苷类抗生素及其杂质已被各国药典广泛采用。高效薄层色谱法的应用可提高灵敏度、重现性和准确度,若结合适当的定量技术可用于含量测定。用扫描密度计与TLC 技术相结合产生的高效薄层色谱法(HPTLC), Bhogte 等[9]用衍生化试剂4-氯-7-硝基苯-2-氧杂-1 ,3-二唑(NBDC L)及荧光光密度分析法的HPTLC 测定了血浆和尿中庆大霉素的含量。高效液相色谱法(HPLC)，其测定药物含量大多采用离子对色谱系统或反相色谱[10-11], 然后根据检测手段的不同可分为质谱检测、电化学检测、紫外检测及荧光检测等。但近年来液相色谱-串联质谱 (HPLC-MS)技术成为测定该类化合物的有力手段。由于氨基糖苷类化合物具有较强的极性，很难在反相色谱柱上保留，因此文献多采用在流动相中添加离子对试剂的方式，通过与被测物形成离子对以增强色谱保留 [12-13]。
