一、解决的问题:①模拟自然水体环境下,不同形态SMX对蛋白小球藻藻密度的影响;②利用流式细胞仪研究不同形态SMX对蛋白小球藻活性的影响;③利用荧光倒置显微镜观察不同形态SMX对蛋白小球藻形态的影响。
二、采用的研究手段实验组:(1)称取一定量的沉积物(已知含水率约为30%),配成0%、0.5%和1%的沉积物-黑碳体系(上述百分比为体系中黑碳含量),加入150微升的SMX母液(50000 mg/L),使体系中SMX含量约为100 mg/Kg。
(2)在500 mL锥形瓶中加入(已加样)沉积物体系50 g,再加入500 mL的(蛋白核小球藻)藻液,封上封瓶膜,放入光照培养箱培养14天。
培养条件:以12小时光照,12小时黑暗一个周期;22℃。
(3)分别在2 h、2天、4天、6天、8天和14天取样测藻的基本指标(包括藻密度、叶绿素a和酯酶活性)以及水体中SMX的浓度。
每一组沉积物体系包括2个对照组(①不加污染物SMX,②不加藻),每一组均设置3个平行,一共27个。
1、 藻密度取1mL藻液,过50微米滤网,通过流式细胞仪自动计数。
计算藻细胞的平均生长率及平均生长抑制率:(1)(2) 表示从i时刻到j时刻的平均生长率( ), 表示i时刻的藻密度, 表示j时刻的藻密度; 表示平均生长抑制率(%), 表示空白对照组的平均生长率, 表示实验组的平均生长率。
作图时间平均生长抑制率2、叶绿素A浓度:1)叶绿素A浓度是根据乙醇提取方法确定的(Ying et al.,2015,Yang et al., 2013a)。
通过将2 mL藻类培养物12000 r/min离心10 min收集藻类细胞后,将藻类沉淀物重新悬浮于2 mL的95%乙醇中,将提取液在黑暗中于60C孵育30 min,然后以12000 r/min离心10min。
