开题报告内容：(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字)
麦冬为百合科植物麦冬[Ophiopogonjaponicus(L.f.)Ker-Gawl]的干燥块根，为常用滋阴中药，始载于《神农本草经》，历代重要本草均有记载。其味甘、微苦，性微寒，归心、肺、胃经，有养阴生津、润肺清心之功效，可用于治疗热病伤津、心烦口渴等病症，传统中医主用于与肺、胃、心阴不足或热伤肺、胃、心阴等相关的病症。现代药理作用研究发现，麦冬在耐缺氧、增强心肌收缩力、抵抗心率失常、抗癌、抗肿瘤及降血糖等方面具有显著的生理药理活性。麦冬主要化学成分为甾体皂苷、高异黄酮、多糖、氨基酸等，研究表明甾体皂苷类和高异黄酮类是其活性物质[1]。麦冬具有养阴生津、润肺清心的功效，现代药理研究表明麦冬类药材具有显著的抗炎活性，皂苷为主要活性成分。
薯蓣皂苷（dioscin）属于甾体皂苷，水解可以得到薯蓣皂苷元（diosgenin，Dio），主要存在于薯蓣科、蔷薇科、石竹科等植物的根茎中，其中尤以薯蓣科含量最多，大多是Dio衍生的皂苷。Dio是合成甾体激素和口服避孕药的原料。近年来随着分离提取技术的不断发展，多种薯蓣皂苷被分离出来，并不断发现其生物活性，特别是在抗肿瘤、免疫调节、抗炎、降血脂、抗艾滋病等方面的作用引起了人们的重视[2]。
鲁斯可皂苷元(Ruscogenin)，又名假叶树苷元，最早是从生长在地中海地区的假叶树(RuscusaculeatusL.)中分离得到的一种甾体皂苷元，具有显著的抗炎、降低毛细血管通透性、调节前列腺功能失调、抑制G 菌和抗弹性蛋白酶等作用。研究发现，鲁斯考皂苷元也是常用滋阴中药麦冬中的主要皂苷元，前期研究表明，麦冬水提物体内外具有明显的抗炎活性，麦冬皂苷D、及其苷元Ruscogenin为其主要活性成分，体外可明显抑制佛波酯诱导的ECV304细胞与HL-60细胞的黏附。白细胞与内皮细胞黏附作用是炎症发生的首要与关键环节[3]。
中性粒细胞是人体抵御外来微生物入侵的第一道防线,是固有性免疫系统中重要的效应细胞。它可藉助Fc受体及补体受体通过吞噬、脱颗粒、ADCC(抗体介导的细胞依赖的细胞毒作用)发挥其杀伤功能。在激活状态下,中性粒细胞还能产生大量的超氧阴离子和活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS),这些分子具有很高的反应性,可以与细菌的细胞膜、核酸分子及蛋白质发生氧化还原反应,造成微生物的损伤和死亡。此外,ROS还可上调一些细胞因子及粘附分子如TNF2alpha;、IL21、ICAM21的表达水平,放大炎症效应[4]。由于该过程中性粒细胞的耗氧量激增,可达正常消耗量的2～20倍,因此又称该反应为呼吸爆发。中性粒细胞呼吸爆发为考察药物对炎症作用的理想模型[5]。在某些病理条件下(如严重创伤、烧伤、休克)，PMN过度激活却可阻塞微循环、损伤血管内皮细胞和血管外组织细胞、释放和促进释放炎症介质，成为破坏者，是导致SIRS，MODS的重要原因。因这种炎性反应与细菌等病原体感染无关，使用抗生素治疗无效，而抑制PMN的过度激活有助于控制炎症。不仅超氧阴离子自由基的衍生物过氧化氢和经自由基具有细胞毒性,而且超氧阴离子自由基本身也具有毒害作用[6]。
Percoll密度梯度离心法，此法是利用不同细胞之间密度不同的性质，通过速度沉降法来分离制备中性粒细胞。Percoll是pharma2cia公司的商品名，为聚乙烯吡硌烷酮(PVP)包被的硅胶颗粒混悬液，渗透压很低[lt;20mosmgt;H2O)]，粘度也很小，可形成113g/mL密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分钟至数十分钟内达到满意的细胞分离效果。由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛应用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离[7]。
fMLP、PMA和AA是已知的中性粒细胞刺激剂，可刺激中性粒细胞产生超氧阴离子，常用于体外试验研究药物对中性粒细胞的作用机制。fLMP是一种细胞膜受体刺激剂，主要通过G蛋白偶联受体介导的信息途径，激活磷酯酶C，产生甘油二酯和三磷酸肌醇，激活NADPH氧化酶[8]。
本课题采用Percoll不连续梯度密度离心法分离纯化小鼠中性粒细胞，fMLP为刺激剂激发中性粒细胞释放超氧阴离子，细胞色素C还原法测中性粒细胞超氧阴离子释放量，考察皂苷抑制中性粒细胞释放超氧阴离子的构效关系。
[1]戴晓明,蒋凤荣,张旭,戴建国,程雪琴,江沛.麦冬不同提取物对过氧化氢损伤人血管内皮细胞ICAM-1、VEGF、Bcl-2表达的影响[J].现代生物医学进展.2008(12)
[2]王晓鹏,陆羡薯蓣皂苷生物活性研究新进展国外医学中医中药分册2004年第26卷第3期
