一、研究背景
透明质酸(hyaluronicacid，HA)是一种广泛分布于人和动物体内的大分子酸性黏多糖，20世纪30年代Mayer首次从动物眼玻璃体中提取得到HA后，HA的生产和应用研究从未中断，至今已有70余年的历史。
透明质酸(hyaluronicacid，HA)，又称糖醛酸、玻尿酸、琉璃糖碳基酸，基本结构是由双糖单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的高级多糖类。与其它粘多糖不同，它不含硫。HA是一种高分子的聚合物，是由单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的高级多糖。D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺之间由beta;-1,3-配糖键相连，双糖单位之间由beta;-1,4-配糖键相连。双糖单位可达25000之多。在体内透明质酸的分子量从5千到2千万道尔顿。
HA具有独特的黏弹性和生理功能，是细胞外基质的主要成分，具有保水、润滑、调节渗透压等作用。因此，HA广泛应用于骨科、眼科、妇科、外科手术后防粘连、整形美容及保健食品等领域。可保护正常细胞免受毒性细胞、自由基等的侵袭，并可影响细胞的增生、分化等。目前，HA的应用主要有：①促进骨折愈合。②轻放疗的副作用：如将HA注射液注射于接受体外放射治疗(external-beam)或腔内近距离放射疗法(braehytherapy)的前列腺癌患者的直肠脂肪上，可以减轻治疗的副作用。③HA的新衍生物如TelIA是一种水溶性的强抗氧化剂，克服了GPX的缺点，并解决了其他具有GPX活性物质抗氧化活性低的问题，在医药领域将具有广泛的应用前景。BitI具有抗幽门螺杆菌活性，由此表明BiHA具有治疗胃溃疡的潜力。还有紫杉醇与HA结合后，水溶性和稳定性得到明显改善，并具有靶向性和控释作用，对HA受体过表达的肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用，但对HA受体缺乏的肿瘤细胞作用不明显。因此，HA-紫杉醇结合物作为特异肿瘤的拮抗剂具有潜在的应用前景。
HA的生产工艺主要分为三大类，即以动物组织为原料的提取法、细菌发酵法和工程菌发酵法。几乎所有的动物组织中均含有HA，只是含量不同，能够用于生产的原料主要为鸡冠和人脐带。原材料中透明质酸含量较低直接导致了产量低。由于提取法的原料来源困难且价格昂贵，提取工艺复杂、操作单元冗杂，同时大量酶和有机溶剂的使用，又在某种程度上增加了透明质酸生产的成本，所以此法已逐渐被生产厂商淘汰。
目前ELISA法主要用于测定血清中HA含量，也有报道用于测定保健品中HA的含量，还未广泛用于发酵液中HA含量的测定。且目前的ELISA试剂盒中用于与HA结合的物质是HA特异结合蛋白，而不是抗HA单克隆抗体。ELISA法具有特异性高的优点，理论上可以减少发酵液中的其他糖、蛋白质以及金属离子对测定结果的影响。HA是胸腺非依赖抗原，为得到其单克隆抗体，需将HA与BSA偶联制成完全抗原后对小鼠进行免疫，通过将免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能合成抗HA单克隆抗体的杂交瘤细胞株，用该杂交瘤细胞株所表达的抗HA单克隆抗体建立ELISA测定发酵液中HA含量的方法。为发酵法生产HA过程中检测发酵液中HA含量提供新的测定方法。
二、研究目的和意义
本课题通过将透明质酸与载体蛋白BSA进行偶联，增强透明质酸的免疫原性，制备免疫原性较强的完全抗原并对其质量和免疫原性进行鉴定。
三、研究手段
