一、研究内容
本课题拟探讨中药墨旱莲中指标性成分蟛蜞菊内酯对体外肺纤维化模型的改善作用，观察蟛蜞菊内酯对Ⅱ型肺泡上皮细胞A549细胞的抑制作用及对相关蛋白表达的影响，为蟛蜞菊内酯在肺纤维化及肺损伤领域的应用研究提供基础。
通过TGF-beta;1刺激A549细胞，建立肺纤维化体外模型。考察蟛蜞菊内酯对A549细胞的增殖抑制作用及总胶原分泌的影响。通过检测蟛蜞菊内酯对体外肺纤维化模型中alpha;-SMA及LC-3蛋白表达的影响，观察蟛蜞菊内酯对肺纤维化的治疗作用及对自噬水平的影响。
二、研究方法
1、实验方案
(1) 蟛蜞菊内酯对A549细胞的增殖抑制作用。
A549细胞株采用含10%胎牛血清（FBS）、青霉素（100kU/L）、链霉素（100mg/L）的高糖DMEM培养液，于37℃、含5％CO2的培养箱中培养至对数生长期。将细胞浓度调整为5x104/ml，200 ul/孔接种于96孔板中，均设置5个复孔，待24h细胞贴壁后，分别设置空白组，对照组，给药组（终浓度为100,80,60,40,20mu;M）。分别培养24h、48h、72h后每孔加入5mg/mL MTT 20uL，继续培养4h。弃去培养液，加入DMSO 150 uL/孔，酶标仪测A值，波长490 nm。计算药物对细胞的增殖抑制率。
(2) 蟛蜞菊内酯对A549细胞总胶原分泌的影响。
天狼猩红苦味酸染色法实验步骤：细胞以5times;104个/ml接种于24孔板，每孔1ml培养48h，弃培养基，每孔加500ul MeOH，-20℃固定24h，弃去MeOH，用孔PBS 500ul洗一次，每孔加天狼猩红染液500ul，37℃染色1h，弃去染液。每孔加500ul 0.1%乙酸，清洗一次，再用相同体积纯净水洗两次，每孔加750ul 0.1mol/L的NaOH，轻微振摇1h，540nm下检测吸光度。
(3)蟛蜞菊内酯对体外肺纤维化模型的治疗作用。
