- 课题研究背景及目的
巨噬细胞(Macrophages)是哺乳动物机体最重要的免疫细胞之一,是机体重要的防御细胞，通过其强大的吞噬、杀伤、消化降解功能及抗原递呈功能在吞噬与清除异物和衰老死亡细胞、分泌生物活性物质、调节血细胞生成与参与免疫应答等方面发挥着广泛的生物学作用[1,2]。
巨噬细胞是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。深入研究巨噬细胞的生物学功能不仅能阐述多种生理与病理机制，而且对临床相关疾病的治疗也具有重要价值和意义。
- 课题研究内容
尽管已经能从多种组织和器官中分离并纯化巨噬细胞，但这些方法实验动物消耗较多，所需时间较长，耗资也较大，因此通过诱导骨髓细胞的分化，建立体外骨髓巨噬细胞(Bone Marrow Macrophages BMMPhi;)的分离、培养及鉴定方法能够为深入研究巨噬细胞的生物学功能奠定良好的基础[2]。
巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在适宜条件下可生活2-3周，多用作原代培养，难以长期生存。培养巨噬细胞可用各种方法和各种来源来获取细胞，分离巨噬细胞的具体部位有腹腔、胸腔、肺、脾脏、骨髓、淋巴结、胸腺、滑膜和血液等，目前最为实用的是小鼠腹腔取材法，而本课题采用的是小鼠骨髓取材法。
骨髓来源的巨噬细胞与血液来源的巨噬细胞及腹腔来源的巨噬细胞在表达活性或功能上有一定差异。体内实验和体外实验因为影响因素的不同实验结果也会有所差异，本课题拟通过分离和培养小鼠骨髓巨噬细胞并用特定条件选择性分化，优化实验条件，使得更贴近体内条件。
- 课题研究方法和手段
1．实验动物：小鼠（约6周龄），体重18-22g。
2. 实验仪器：超净工作台、移液器、一次性医用注射器、手术用器械、培养皿、离心管、高速冷冻离心机、培养瓶、24孔培养板、CO2恒温培养箱、倒置显微镜等。
3. 实验试剂：Hankrsquo;s液、RPMI1640培养基、青霉素液、链霉素液、胎牛血清、PBS液等。
4. 实验方法：取小鼠股骨及胫骨骨髓制成细胞悬液，对细胞悬液进行纯化，再按一定密度接种于培养板内，加入适量RPMI1640培养液后置于37℃、5% CO2、饱和湿度的培养箱中培养。对所培养骨髓巨噬细胞细胞用Gomori酸性磷酸酶（ACP）铅法染色进行鉴定，并通过鸡红细胞吞噬试验进行吞噬功能的检测[3-6]。
