重楼叶的化学成分研究文献综述

 2022-12-29 15:45:12
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开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

  1. 拟研究或解决的问题：重楼叶的化学成分。目前，重楼多以根茎入药，野生药用植物资源不足，然而地上部分未得到利用，造成了资源的浪费。研究重楼叶的化学成分，若与根茎相同或类似，可以考虑用重楼叶补充入药。
  2. 拟采用的研究手段
  3. 重楼叶中总皂苷的提取与分离：

将重楼叶粉碎,用75%乙醇回流提取或者超声提取,合并提取液,真空浓缩,滤过；然后将得到的上清液上大孔吸附树脂柱,用30%乙醇洗脱,弃去洗脱液；再用70%乙醇洗脱,将75%乙醇洗脱液合并, 水浴蒸干后干燥即得重楼总皂苷

2、重楼叶中总皂苷的分离：

用适量甲醇溶解, 硅胶拌样, 进行硅胶柱色谱分离, 依次用二氯甲烷-甲醇 (9∶1) , 二氯甲烷-甲醇-水 (5∶1∶0.1→7∶3∶0.3) 和甲醇为洗脱剂洗脱, 根据薄层硅胶色谱检测合并相同流分；再将各流分用Sephadex LH-20柱色谱分离, 依次用体积分数40%, 50%和80%甲醇洗脱, 薄层色谱检测相同流分。[[1]]

3、结构鉴定：

使用质谱、核磁等手段对分离得到的单体化合物进行结构鉴定。

  1. 文献综述

1、简介

重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var. yunnanensis （Franch.）Hand. -Mazz.或七叶一枝花 Paris polyphylla Smith var. chinensis （Franch.） Hara的干燥根茎。秋季采挖，除去须根，洗净晒干入药。味苦，微寒，有小毒。归肝经。有清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊之效。常用于疔疮痈肿，咽喉肿痛，蛇虫咬伤，跌扑伤痛，惊风抽搐。[[2]] 是常用中成药“云南白药”、“季德胜蛇药片”等的重要原料。

  1. 重楼的主要化学成分

2.1 甾体皂苷

甾体皂苷是一类由带螺甾边链的甾体苷元与糖的端基上碳羟基脱水而成的化合物, 广泛存在于重楼属植物中, 是其主要的活性成分。甾体皂苷元按C25的构型和F环的环合状态可分为异螺甾烷醇型(isospirostanols)（C25为R构型）、螺甾烷醇型 (spirostanols) （C25为S构型）、呋甾烷醇型(furostanols)（F环为开链衍生物）、变型螺甾烷醇型(pseudo-spirostanols) （F环为五元四氢呋喃环）。

2.1.1异螺甾烷醇型(isospirostanols)

目前已有学者从重楼属植物中分离纯化得到93个异螺甾烷醇型化合物。异螺甾烷醇型化合物是重楼主要活性物质。螺甾烷型甾体皂苷一般可由苷元C-17是否有alpha;-OH可以分偏诺皂苷(pennogenin)、薯蓣皂苷。一般在5 (6) 双键, 3、7、23、24、27位有羟基取代。糖部分有D-葡萄糖、L-鼠李糖, 还有少量的D-木糖。糖基与苷元C3-OH成苷, 少数与C1-OH、C23-OH、C27-OH成苷。主要有重楼皂苷II、重楼皂苷V、重楼皂苷VI、重楼皂苷VII等活性成分。目前Qin等[[3]]从滇重楼的茎叶提取分离到薯蓣皂苷元 (Diosgenin) 、重楼皂苷Ⅰ (parisaponinⅠ) 、重楼皂苷Ⅱ (paris saponinⅡ) 重楼皂苷Ⅲ (polyphyllinⅢ) 、重楼皂苷Ⅴ (polyphyllinⅤ) 、重楼皂苷Ⅵ (polyphyllinⅥ) 、重楼皂苷Ⅶ (paris saponinⅦ) 、progeninⅡ、hypoglaucin H、chonglouside H、polyphyllin A等11种甾体皂苷。

偏诺皂苷元（C-17有alpha;-OH） 薯蓣皂苷元（C-17无alpha;-OH）

2.1.2螺甾烷醇型 (spirostanols)

目前从重楼属植物中已提取分离得到8个螺甾烷醇型化合物。

Sun等[[4]]从北重楼地上部位中分离得到的parisverticoside A (23S, 24S, 25S) -螺甾-5-烯-1beta;, 3beta;, 23, 24-四醇-1-O-alpha;-L-鼠李吡喃糖基 (1→2) -[beta;-D-木吡喃糖基 (1→3) ]-beta;-D-葡萄吡喃糖苷是C25为S构型的螺甾烷醇型化合物。母核结构如下。

陈昌祥、Qin[[5]]等从滇重楼茎叶中分离得到3个螺甾烷醇型化合物, 其甾体苷元均是25S-异纽替皂苷元 (isonautigenin) ，结构如下图所示。

2.1.3呋甾烷醇型(furostanols)

从重楼属植物已分离得到22个呋甾烷醇型化合物。呋甾烷型甾体皂苷是一类F环开裂，形成OCH3产物。因而，通常认为呋甾烷型甾体皂苷常是螺甾烷型甾体皂苷的前体化合物。呋甾烷型甾体皂苷一般无抗菌、细胞毒等生物活性。苷元除在C3-OH成苷外, 也存在C26-OH与葡萄糖成苷, 在3, 7, 17, 26位有羟基取代。

2.1.4变型螺甾烷醇型(pseudo-spirostanols)

重楼属植物中共含有13个变型螺甾烷醇型甾体皂苷，其苷元均为纽替皂苷元（nautigenin），都是从滇重楼茎叶中分离得到的。这类化合物也是重楼属地上部位所特有的成分，目前没有从重楼根茎中分离得到过。这类纽替皂苷元在3、7、17、26位有羟基取代。Qin等从滇重楼的茎叶中分离出chonglouside SL-9～SL-15、abutiloside L、nuatigenin-3-O-Rha-(1→2)-Glc等化合物，其中化合物132、136具有强烈的抗人肝癌HepG2细胞和人胚胎肾细胞HEK293增殖的作用。

这4种类型甾体皂苷在重楼属地上部位均存在, 其中异螺甾烷醇类化合物含量最多。主要有重楼皂苷II、重楼皂苷V、重楼皂苷VI、重楼皂苷VII等活性成分，约占总化合物的80%[[6]]。贾天颖等人采用薄层色谱法、高效液相色谱法结合多元统计分析方法对云南重楼、七叶一枝花及重楼混淆品延龄草进行多方面分析研究，结果显示，2种法定基原重楼所含皂苷以重楼皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅶ为主，而易混淆品延龄草的根茎中重楼皂苷Ⅵ的含量较高。[[7]]因此，在进行重楼药材鉴别时可以考虑以重楼皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅶ为主，重楼皂苷Ⅵ为辅。

2.2 黄酮类

黄酮类是重楼属植物的脂溶性成分，多数具有生物活性。杨金霞等[[8]]以武当山区野生转家种宽叶重楼为样本,根据黄酮类化合物能与铝离子反应形成荧光螯合物的原理,采用荧光分光光度法，测定宽叶重楼不同采收期地上部分总黄酮含量,得出结果：宽叶重楼地上部分总黄酮含量在4月上旬最高,随后呈降低趋势,到6月下旬种子开始发育时含量再升高,然后再下降,到7月下旬最低。4月上旬、下旬,5、6、7、9月总黄酮含量分别为1.11%、0.76%、0.47%、0.70%、0.19%、0.53%。若以总黄酮含量为考察指标,考虑到植株生长发育的实际因素,宽叶重楼地上部分可在6月中下旬采收。赵猛等[[9]]从福建产的华重楼地上部分体积分数75%乙醇提取物中分离鉴定了11个化合物, 包括8个黄酮苷，山柰酚3-O-beta;-D-吡喃半乳糖苷, 紫云英苷, 异鼠李素3-O-beta;-D-吡喃葡萄糖苷, 山柰酚3-O-beta;-D-吡喃葡萄糖- (l→2) -beta;-D-吡喃半乳糖苷，异鼠李素3-O-beta;-D-吡喃葡萄糖- (l→2) -beta;-D-吡喃半乳糖苷，山柰酚3-O-beta;-D-吡喃葡萄糖- (1→2) -beta;-D-吡喃葡萄糖苷，异鼠李素3-O-beta;-D-吡喃半乳糖- (l→6) -beta;-D-吡喃葡萄糖苷，异鼠李素-3-O-龙胆双糖苷。主要为山柰酚或异鼠李素的葡萄糖或半乳糖苷。以往的研究从滇重楼、北重楼、五指莲等重楼属植物中共分离得到了17个黄酮及其糖苷, 糖单元多为葡萄糖和鼠李糖。

2.3植物甾醇类

植物甾醇类的营养价值高、生理活性强，可通过降低胆固醇以达到减少患心血管疾病风险的药理疗效。七叶一枝花地上部位主要有beta;-谷甾醇、胡萝卜苷、麦角甾-7, 22-二烯-3-酮和3beta;, 5alpha;, 9alpha;-三羟基-麦角甾-7, 22-二烯-6-酮。[[10]]滇重楼茎叶中分离出7alpha;-羟基-豆甾醇-3-O-beta;-D-葡萄吡喃糖苷和7beta;-羟基-谷甾醇-3-O-beta;-D-葡萄吡喃糖苷两个植物甾醇苷类化合物。赵猛等从福建产的华重楼地上部分体积分数75%乙醇提取物中分离鉴定出corchionoside C和coronatasterone。[[11]]

2.4 植物蜕皮激素类

研究显示，从云南重楼、四叶重楼等17个种(和变种)中分离测定到4种beta;-蜕皮激素(beta;-ecdysone)。其中，从北重楼中分离得到筋骨草甾酮(ajugasterone)、蜕皮甾酮(alpha;-ecdysone)；从多叶重楼中分离得到新的蜕皮激素蚤休甾酮(paristerone)。[[12]]

2.5 其他类化合物

重楼属植物还含有糖类、醌类、脂肪酸类、生物碱类及苯丙素类等化合物。

  1. 重楼甾体皂苷的药理作用

3.1抗肿瘤作用

抗肿瘤作用是重楼皂苷的重要作用。以下为重楼中几种重要活性成分的抗肿瘤作用机理。

3.1.1 重楼皂苷Ⅰ

重楼皂苷Ⅰ能促进结肠癌细胞及其耐药细胞凋亡, 对结肠癌细胞及耐奥沙利铂细胞均有良好的抗肿瘤活性作用, 其抗肿瘤作用是通过介导结肠癌细胞凋亡实现的。重楼皂苷Ⅰ对 HaCaT细胞的增殖具有抑制作用, 具有时间和浓度依赖性, 说明重楼皂苷Ⅰ对HaCaT细胞的生长有量-效和时-效关系。此外, 重楼皂苷Ⅰ在卵巢癌细胞的体外生长过程中起到明显抑制作用, 且能通过干扰细胞周期、诱导细胞凋亡从而影响卵巢癌细胞的生长, 发挥抗肿瘤作用。[[13]]王琳娜研究了九种重楼皂苷对肺癌细胞的影响，发现均能明显抑制A549细胞增殖,其在体外具有较好的抗肺癌作用,其中重楼皂苷Ⅰ抑制作用最强,重楼皂苷Ⅱ次之。[[14]]

3.1.2 重楼皂苷Ⅱ

重楼皂苷Ⅱ能有效促进人卵巢癌细胞SKOV3的凋亡, 且作用时间越长, 剂量越大, 细胞凋亡率越高。11.王琳娜研究了九种重楼皂苷对肺癌细胞的影响，九种重楼皂苷均能抑制A549细胞的侵袭和转移,其中重楼皂苷Ⅱ对A549细胞侵袭及转移的抑制作用较为突出;重楼皂苷Ⅱ抑制肺癌A549细胞的侵袭和转移作用可能与降低金属蛋白酶家族的MMP-1、MMP-2和MMP-9基因和蛋白的表达有关;重楼皂苷Ⅱ通过介导A549细胞的PI3K/AKT/mTOR信号通路调控下游功能性蛋白,抑制A549细胞的侵袭和转移,发挥抗肿瘤作用。

3.1.3重楼皂苷Ⅵ

重楼皂苷Ⅵ可通过降低基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达与活性, 抑制结肠癌细胞LoVo的迁移, 从而发挥抗肿瘤作用。11

3.1.4重楼皂苷Ⅶ

重楼皂苷Ⅶ可以通过线粒体和死亡受体途径诱导SW-480细胞凋亡, 将SW-480细胞周期阻滞于G1期, 通过上调P21, 抑制Cdk-4、Cdk-6 与Cyclin D1周期调控蛋白的表达, 从而起到抑制人结肠癌的作用。11

3.2 其他作用

重楼皂苷有抗菌、消炎、止血、抗血管生成的作用。可改善肝纤维化大鼠肝功能, 具有保肝作用。对微囊藻毒素所致的肾损伤具有保护作用, 能明显改善肾脏组织结构改变。11

  1. 结语

近年来，随着重楼的市场需求量增大，野生重楼的采集量大大增加，重楼野生资源逐渐枯竭，而种植重楼所需培育周期长、风险大，导致重楼药材和饮片价格急剧增长。重楼一般仅根茎入药，地上部分植株作为废弃物被丢弃, 造成了资源浪费。但是，重楼地上部分的皂苷含量丰富，且为一年生，可以持续利用，充分发挥其药用资源作用。重楼地上茎叶可以作为重楼根茎的补充入药, 可有效缓解市场供需矛盾, 缓解重楼资源保护与利用的压力。邹亮等人测定不同产地、不同部位滇重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量，滇重楼不同部位的4种重楼皂苷的总含量为根茎gt;叶gt;果实gt;须根gt;茎[[15]]，叶的皂苷含量仅次于根茎。因此, 明确重楼叶的化学组成, 科学评估其利用价值, 对于资源的综合利用与开发具有重要意义。

学生签名： 年 月 日

指导教师意见：

指导教师签名： 年 月 日

所在教研室（实习单位）审查意见：

负责人签名： 年 月 日

填写说明

1.指导教师意见填写对文献综述的评语，对本课题的深度、广度及工作量的意见和对论文结果的预测；

2.所在教研室（实习单位）审查意见包括对指导教师意见的认定和是否同意开题等。

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