诱导表达X基因的稳转细胞系构建及验证文献综述

 2022-12-29 15:38:42

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

课题解决的问题

癌症是现代生活中严重危害人类健康的重大疾病。其发病率和死亡率高。据 WHO 公布的数据,每年的癌症发病率超过 1500万,死亡人数接近 1000万,已经成为人类的主要杀手之一。随着癌症的诊断手段和治疗技术进步,在传统的手术治疗之外,科学家也在探索新的治疗方法,分子靶向治疗逐渐成为癌症治疗的较好选择。寻找有效的分子靶点一直是癌症领域及临床研究的焦点问题。

糖代谢异常在肿瘤发生和发展中起到重要的作用,许多重要的靶分子成为了人们的关注热点。果糖-1,6-二磷酸酶 1 (果糖-1,6-双磷酸盐 1,FBP1) 作为一种新的靶分子,逐渐成为学者们研究的热点。FBP1是糖异生过程中的限速酶,在糖代谢、细胞分化、细胞增殖、侵袭及凋亡中均发挥重要作用。近年来研究表明,FBP1 的表达与肝癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌和胆管癌的发生发展密切相关。它在这些癌症中的表达减少,它被认为在这些癌症中是其肿瘤抑制因子。

本实验旨在利用 tet-on 慢病毒构建方法,构建诱导 FBP1 表达的稳定转移细胞系,并通过 Western Blot 方法检测其诱导表达。

课题采用的研究手段和步骤

本论文主要以实验为主,经查阅文献了解相关知识,并与指导老师交流讨论,通过大量实验得出数据完成论文。

1.过表达FBP1的慢病毒载体构建。选取合适的病毒载体,通过载体酶切、获取目的基因片段、构建重组质粒并验证、质粒抽提等方法得到重组质粒备用。

2.慢病毒包装。利用含有目的基因的载体和病毒包装辅助质粒(Helper1.0和Helper2.0)共转染293T细胞,收集上清,离心浓缩纯化得到慢病毒。

3.慢病毒验证。转染后细胞状态,Western Blot检测转染后细胞的表达情况。

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