开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 研究背景
有研究证实，长链非编码RNA（Long noncoding RNA, lncRNA）在患者体内的差异性表达是导致自身免疫疾病的一个原因。lncRNA通过microRNA响应元件作为“语言”从而影响mRNA的表达。课题组前期确定了小鼠EAE模型组和正常组小鼠中与TH17细胞极化相关的差异表达的lncRNA，命名为lncRNA-119414，并通过生物信息学分析联合qPCR寻找到其相互作用的microRNA分子为miR-686，随后利用miRNA数据库进行miR-686靶基因预测获得其可能靶基因序列CCL7。
本课题将利用双荧光素酶报告基因技术对miR-686及其靶基因CCL7的相互作用进行检测，以验证二者是否相互结合，从而进一步揭示lncRNA在MS病程中的功能及作用机制。
- 研究手段
双酶荧光素报告基因验证CCL7和miR-686的结合：
- 双酶荧光素报告基因载体构建：获取含miR-686结合位点的CCL7基因的3rsquo;UTR野生型基因片段CCL7-3rsquo;UTR-WT并对与miR-686的结合位点进行点突变处理获得突变型CCL7-3rsquo;UTR-Mut。将CCL7基因3rsquo;UTR野生型与突变型片段送去公司合成含有酶切位点的长单链引物，经退火，与pMIR-GLO载体连接，将构建的载体分别命名为pmirGLO-CCL7-WT和pmirGLO-CCL7-Mut。
- 细胞转染：将双荧光素酶报告基因质粒（pmirGLO、pmirGLO-CCL7-WT、pmirGLO-CCL7-Mut）与miR-686mimics（miR-NC、miR-686）两两组合共转染HEK293T细胞。
- 荧光素酶活性检测：转染48h后测定荧光素酶活性，并进行统计学处理，计算相对荧光强度，通过比较野生型与突变体的荧光值变化来验证二者是否结合。
- 文献综述
lncRNA-miRNA-mRNA相互作用网络
摘要
随着现代分子生物学和生物信息学的发展，关于人类各种生命活动的机制的研究更多的集中到了分子层面上来，随着研究的进一步深入，人们发现非编码RNA能通过多种途径对于基因的表达进行调控，进而控制我们生命活动的各个方面。本文将对lncRNA和miRNA进行基本介绍，并对lncRNA-miRNA-mRNA互作网络的情况进行基本阐述。
Abstract
With the development of modern molecular biology and bioinformatics, research on the mechanisms of various human life activities has focused more on the molecular level. With the further research, people have discovered that non-coding RNA can be The expression of genes is regulated to control every aspect of our life activities. This article will give a basic introduction to lncRNA and miRNA, and explain the situation of lncRNA-miRNA-mRNA interaction network.
- lncRNA
1.概述
