一、课题背景
心肌纤维化是指心脏在受到外部刺激或其它因素导致组织中细胞外基质大量聚集，引起心脏功能受损的一种病理过程。存在于多种心血管疾病,如房颤、心肌肥大、糖尿病性心肌病以及心肌梗死等[1]，心纤维化与心衰发生密切相关。预防和抑制心肌纤维化已经成为防治心衰的重要手段。
黄芪与人参是传统补益中药。黄芪为豆科多年生草本植物[2]，属“补气”之药，具有补气活血，益卫固表之效，黄芪甲苷是黄芪的主要成分，广泛用于多种心血管疾病的治疗。其中抗心梗合剂，补心丹，和黄芪桂枝汤等中都含有黄芪。人参是五加科植物人参的干燥根及根茎，自古被称为“百草之王”，有滋阴补生，扶正固本之功效，医圣张仲景的名方炙甘草汤中就含有人参，对于心血管疾病有较好疗效，至今仍然被广泛应用。人参的主要成分人参皂苷（Ginsenoside，GS），其包含许多单体成分,如Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg3、Rh2等。有研究表明[4]Rb1和Rg1可有效减轻各种如心肌缺血、心肌细胞肥大、等原因所导致的心肌损伤，Rg3可以改善大鼠心肌缺血/再灌注损伤 [5]。
异丙肾上腺素对心beta;1受体具有强大的激动作用，使心肌收缩力增强、心率加快，收缩期和舒张期缩短导致心肌纤维化。采用异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化模型，给予黄芪和人参的主要有效成分黄芪甲苷和人参皂苷Rb1、Rg1和Rg3进行干预，观察其在抗心肌纤维化方面的作用，并且探索其具体的作用机制。
- 要解决的问题
- 采用异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化模型，观察补益中药黄芪的主要成分黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Rg1和Rg3对心肌纤维化的治疗作用及其相关机制。
- 培养小鼠成纤维细胞（NIH-3T3），通过沉默和过表达等手段，探讨黄芪甲苷，人参皂苷Rb1、Rg1和Rg3抗纤维化作用靶点及信号通路。
- 可行性分析
黄芪的主要成分黄芪甲苷IV(Astragaloside IV ，ASG IV)具有多种药理活性，其抗病毒，抗炎，抗氧化应激等作用明显，可以加强心脏收缩力，保护心肌，抗心力衰竭[5]。另外，相关研究表明，黄芪甲苷能抑制成纤维细胞的异常增殖分化，抗纤维化作用十分明显[6]，但其相关机制需进一步探讨。
人参皂苷是人参的主要活性成分，是一种类固醇类化合物，其中人参皂苷Rb1和Rg1在调节心血管功能中研究较多[7]。研究表明[8]，人参皂苷可以改善血管内皮细胞功能，同时对缺血/再灌注或化学物质造成的心肌细胞损伤具有保护作用, 进而抑制心室重构、心律失常、心室肥厚以及心肌肥大等。其中Rb1和Rg1可有效减轻各种如心肌缺血、心肌细胞肥大、等原因所导致的心肌损伤[4]，Rg3可以改善大鼠心肌缺血/再灌注损伤[5]。因此，通过制备大鼠心肌纤维化模型，研究补益中药人参皂苷治疗心肌纤维化的具体机制。
- 研究方法和内容
大鼠纤维化模型采用异丙肾上腺素诱导的心肌纤维化模型，Western Blot技术检测纤维化相关蛋白alpha;-SMA、Collagen I的表达，比较正常、模型和给药组的心肌纤维化程度。
给药结束后取心脏组织存储于-80℃，通过qPCR技术检测miR-135a的表达，Western Blot检测TRPM7、Smad3、TGF-beta;1等蛋白的表达情况。比较正常、模型及给药组的差异并对上述结果进行统计学分析。
最后培养小鼠成纤维细胞（NIH-3T3），通过转染沉默TRPM7基因或者诱导miR-135a过表达，通过qPCR技术检测miR-135a的表达，Western Blot检测TRPM7、Smad3、TGF-beta;1等蛋白的表达情况。探讨黄芪甲苷/人参皂苷抗纤维化作用与TRPM7、Smad3、TGF-beta;1、miR-135a的关系。
- 工作计划
2月25日—3月10日：完成文献查阅、开题报告等前期工作。
