五步蛇多肽组中功能多肽的挖掘文献综述

 2022-12-24 15:21:25

开题报告内容:

  1. 课题背景

近年来生物活性肽作为功能成分或药物制剂引起人们的广泛关注,随着新的分离鉴定技术发展,生物活性肽的功能与其序列及结构的关系引人注目。但根据现有的水平,难以通过序列预测二级结构来进一步的预测其生物活性与功能。因此通过类比具有相似功能的多肽间序列的相关性,可以在一定程度上预测具有与该序列相似序列的多肽的生物活性。

  1. 课题解决的问题

对五步蛇多肽组中的生物活性较高的多肽进行分类、序列比对、预测功能。在预测功能后选择几个具有代表性的多肽进行分离与功能验证。

  1. 实验器材和方法

3.1材料 实验仪器WHY-2往返水浴恒温振荡器、XH-C旋涡混合器 WF J2007可见分光光度计

药物和试剂丁基羟基茴香醚、大豆卵磷脂、三氯乙酸、六水合三氯化铁、ferrozine试剂

3.2实验方法

3.2.1螯合铁离子的能力取 以去离子水为空白对照组0.5ml待测品加入0.1ml2mmol/L的二氯化铁溶液搅拌均匀,静置十分钟。加入0.2ml 5mmol/L的ferrozine溶液搅拌均匀。静置反应10min后在562nm处测定其吸光度A值。之后再进行3次平行试验测定数据,取平均值计算清除率。进而计算铁离子的被螯合率。

3.2.2还原能力的测定在标准比色管中依次加入样品,每次1ml,空白对照组用去离子水代替、2ml 1g/100ml的铁氰化钾以及磷酸盐缓冲液,搅拌均匀后在50℃的恒温箱中保存30min。之后再冰浴中快速冷却10min后加入三氯乙酸2.5ml 10g/100ml(TCA)。待其混匀之后4000r/min进行离心持续十分钟。离心结束后取上清液2.5ml,加入等体积的蒸馏水以及0.5ml0.1g/100ml的氯化铁溶液,静置15min。待其混匀后在700nm处测量吸光度。

3.2.3清除自由基活性 将7 mmol/L的10 mLABTS溶液和7.35 mmol/L的5 mL过硫酸钾溶液混合后在室温下避光放置12~ 16小时使其形成ABTS储备液,用无水乙醇将ABTS储备液稀释成ABTS工作液,734 nm波长处的吸光度应为0.70plusmn;0.02。吸取50 mu;样品与3 mLABTS工作液混合,室温下静置10 min进行反应,待其混合均匀后,于734 nm波长处测定其吸光度,以水代替样品作为空白对照组,计算ABTS 清除率。

  1. 研究方法和技术路线

选择几个权威的多肽数据库如CAMP(collection of Anti-Microbial Peptides),一个为了扩展和加速抗菌肽家族而建立的抗菌肽数据库,抗菌肽具有特异性的序列,可用于发现和设计新的抗菌肽。BIOPEP,是生物活性肽序列的数据库,也作为评估生物活性肽前体的蛋白质的工具。其中将发现的活性肽分为多种类别,包括腹腔毒素、神经肽、抗菌肽、溶血、抗氧化肽、免疫调节等。

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