1.选题背景
Herceptin( 曲妥珠单抗Trastuzumab)是针对Her-2 受体的高纯度重组DNA衍生的人源化单克隆抗体, 由美国旧金山基因技术公司和罗氏药厂联合研究生产, 1998 年被美国FDA批准上市。单用抗Her-2/neu 的单克隆抗体Herceptin 对Her-2/neu 过度表达的转移性乳腺癌有较好效果, 也可与泰素、诺维本、健择和顺铂等化疗药联合应用。
2.研究的主要内容
通过构建表达载体、瞬时转染CHO获取目的蛋白Herceptin，确定并优化方法纯化目的蛋白，并对获得的蛋白进行鉴定及分析。
3.研究的方法和步骤
（1）表达载体的构建：将目的蛋白对应的基因片段连接在质粒载体上，通过E.coli获得大量重组质粒。抽提质粒，获得高浓度质粒溶液。
（2）瞬时转染：通过脂质体化学瞬转的方法，用PEI试剂将重组质粒转染进CHO细胞中。将细胞培养7-10天，定期计数，根据细胞活率确定收获细胞分泌蛋白的时间。
（3）收获目的蛋白：室温8000rpm离心收取细胞培养液上清液，再用0.22mu;m滤膜过滤，测效价。
（4）纯化抗体：
①用protein A （mab select XL）层析柱捕获治疗性抗体，检测蛋白浓度。
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