开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
SOWAHA蛋白的功能性研究
【选题目的】
先天免疫,也就是人体固有的免疫,它能通过某种方式直接识别“外来物”并活化免疫系统对其加以攻击。很早以前人们发现了先天免疫会利用一些天生的受体,俗称模式识别受体(pattern recognize receptors, PRRs),这些受体可以识别一些非自我、来自病原微生物的产物(也称病原相关分子模式,pathogen-associated molecular patterns, PAMPs)或带有自我伤害性质的宿主分子(damage-associated molecularpatterns, DAMPs),之后激活自身免疫系统来清除外来物或对自身有损害的分子。从而激活抗病毒信号通路并诱导I型干扰素(IFN)以及促炎因子的表达,达到抑制病原体的感染并激活获得性免疫应答的目的。但是固有免疫的发生机制到底是什么呢?科学家们据此展开了大量研究,目前已发现cGAS-STING信号通路在激活这一固有免疫反应中其关键作用。而本次研究课题正是基于在研究中发现肿瘤细胞中固有免疫的发生可能与SOWAHA蛋白有一定的联系,目前对于SOWAHA蛋白的研究相对较少,因此对其展开研究,旨在研究SOWAHA蛋白与信号通路的关系。
【研究方法及手段】
研究方法:
目的基因的扩增;目的基因的检测;载体的选择;限制性内切酶切割质粒和目的基因;连接酶接连目的基因和载体;连接产物的转化;单菌落大肠杆菌培养;抽取质粒;用琼脂糖凝胶电泳检测连接产物;包病毒;培养细胞;收细胞;HPLC以及Western Blot检测等。
实验材料:基因工程菌种:E. coli DH5alpha;菌、质粒pLJM1-BioID、37摄氏度培养基,37摄氏度空气振荡器,微型离心机,离心管(灭菌),LB培养基,LB抗性(添加氨苄青霉素抗生素)培养基等。
实验关键技术:
目的基因的获取:PCR法:针对目的DNA的5端和3端设计一对特异引物,在每条引物的5端分别加上不同的限制性酶切位点,然后以目的DNA为模板PCR扩散,便可得到带有引物序列的目的DNA,再用相应的限制性内切酶切割PCR产物产生黏性末端,随后便可与带有相同黏性末端的线形化载体进行有效连接。
