抗肿瘤活性物质CPU-L1体内分析方法的优化
15404802 曹静
摘要：目的：对以往建立的测定CPU-L1在大鼠血浆中的RP-HPLC方法进行优化，提高方法的灵敏度。方法：1.比较不同溶剂系统对CPU-L1的溶解能力及稳定性2.考察不同样品处理方法对测定灵敏度的影响并选出最优的样品处理方案3.在上述实验的基础上优化色谱条件并进行方法学验证4.测定大鼠血液样本中的CPU-L1的浓度并计算药代动力学参数。预期结果：1.三种溶剂系统溶解样品均优于纯甲醇，但乙醇：吐温80：蒸馏水=1；3；6混合液溶解样品更稳定。2.改进乙酸乙酯-氮吹法处理血浆样品，将其残留物溶于硫酸锌溶液[m（硫酸锌，g）：V(甲醇，ml）：V（乙二醇，ml）=0.5：100：1]效果更佳。3.HPLC 系统及条件：色谱柱 Thermo ODS-2 HYPERSIL ( 150mmtimes; 4.6mm，5mu;m)，预柱 ODS-SP 5mu;（4oslash; x 10）；流动相使用甲醇和纯水来进行梯度洗脱，紫外检测波长为254nm，柱温控制在25℃左右 ；流速为 1ml/min, 进样量10micro;l。确定的标准曲线的范围是0.25~200mu;g/mL,定量限为0.25mu;g/mL。4.CPU-L1在大鼠体内过程符合二室模型。
关键词：RP-HPLC、内标法、药代动力学、尾静脉给药
前言
肿瘤是现代社会威胁人类身体健康的首要疾病。多年来，广大科研人员和学者致力于寻找新型、高效、低毒的抗肿瘤化合物（1）。而海洋作为占地球面积达70%的生物宝库，近年来，愈发引起人类特别是科学家的关注。在海洋这个特殊的大环境下生存的生物，有着与陆地生物截然不同的生活习性和生理构造。为了抵抗海洋环境下的高盐、高压、营养成分缺失以及低温等恶劣因素，海洋生物自身进化出一套不同的新陈代谢途径和自身免疫方法，以来吸收环境中的养分，同时保护自身。因此，海洋生物有着广阔的抗癌活性前景，甚至有科学家曾预言最有研究价值的抗癌药物将产自海洋。然而海洋中的生物种类实在过多，在人类有限的勘测范围内，研究人员着重从大环内酯类、生物碱类、醌类等来自海洋生物的代谢产物常有抗肿瘤前景。随着深海标本采集技术的发展和大规模海水养殖的发展，到目前为止已报道并报道了3000多种新型化合物具有抗肿瘤、结构新颖、作用独特、种类繁多。目前，有数十种抗肿瘤效果良好、低毒的海洋天然活性化合物进入临床或临床前试验，经过多年的发展，抗肿瘤药物的研发取得了许多重要进展。然而，最严重的威胁人类生命和健康的生命安全，超过90%的实体肿瘤的恶性肿瘤仍缺乏有效的对策、特异性强的药物，这反映了艰难的抗癌药物的研究与开发，另一方面也意味着抗肿瘤药物的发展也需要思路。随着生物技术的发展海洋微生物资源开发利用的进一步深入，细胞工程、发酵工程、基因工程等技术的应用必将促进海洋微生物活性物质的研究发展，预计未来定会实现海洋微生物活性次级代谢产物的规模化生产，使海洋微生物成为开发新药的重要来源。
高效液相色谱法又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75%～80%）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。而反相高效液相色谱法在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。高效液相色谱法有“四高一广”的特点：高压高速高效④高灵敏度⑤应用范围广此外，还有色谱柱可反复使用，样品量少、容易回收等优点。
其中梯度洗脱已成为现代高效液相色谱中不可缺少的部分。在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素，以提高分离效果。
药物代谢动力学简称药代动学或药动学，主要是定量研究药物在生物体内的过程（吸收、分布、代谢和排泄），并运用数学原理和方法阐述药物在机体内的动态规律的一门学科。确定药物的给药剂量和间隔时间的依据，是该药在它的作用部位能否达到安全有效的浓度。药物在作用部位的浓度受药物体内过程的影响而动态变化。在创新药物研制过程中，药物代谢动力学研究与药效学研究、毒理学研究处于同等重要的地位，已成为药物临床前研究和临床研究的重要组成部分。
优化使用HPLC法的CPU-111在大鼠体内血药分析方法并测量血药浓度和药效学参数测定
