开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
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选题依据
- 研究现状
1.1.1 凝血因子X的结构特点及生理功能
凝血因子X与上世纪五十年代从一种先天性血液疾病的研究中被发现，并在六十年代至七十年代被从人类的血浆中成功分离出来。以此为界限，凝血因子X得到了较为深入的研究。
成熟的凝血因子X的分子量为59000，由448个氨基酸残基组成，在血浆中以双链形式存在，由重链(MW 42000)和轻链(MW 16200)经二硫键连接而成，凝血因子X在合成时为一单链分子，在血浆中被“胰蛋白酶样蛋白酶”裂解，精氨酸140-赖氨酸141-精氨酸142这三个氨基酸被从分子中移除，从而形成了分子量16200的轻链（第1至139位）和分子量42000的重链（第143至448位）的双链。凝血因子X半衰期为48-72小时，是一种依赖维生素K的糖蛋白，含糖量约为15%。电泳介于前白蛋白与alpha;球蛋白区，等电点4.9-5.2。
凝血因子X蛋白拥有四个功能域：一个gamma;-羟基谷氨酸区（Gla区）、两个表皮生长因子区（即EGF区）和一个催化区。轻链氨基端40个氨基酸残基组成的队段为gamma;-羟基谷氨酸区（即Gla区），其中含有11个Gla残基。这个区的主要功能是结合Ca2 ，并进一步与膜磷脂结合，其中第16、26、29位Gla残基对维持活化凝血因子X的正常功能十分重要，Gla区只见于维生素K依赖因子的结构中维生素K作为羧基化酶的辅酶，参与此区gamma;-羟基谷氨酸的形成。在Gla区之后是一个芳香族氨基酸聚集区（苯丙氨酸40、色氨酸41和酪氨酸44）。随后是两个上皮生长因子样结构区（即EGF区），各由约40个氨基酸残基组成，共82个氨基酸，包括6个半胱氨酸残基和3个甘氨酸，6个半胱氨酸残基之间形成了3个二硫键。表皮生长因子区的功能在于结合Ca2 和维持活化凝血因子X的正确空间构象。重链是酶促活性区所在，包括了一段激活肽和一个催化区。激活肽由52个氨基酸残基组成，其功能是在凝血因子X激活的过程中释放独立的短肽，发挥负调控机制来限制凝血因子X被无效激活，并接到激活物以依赖辅因子的方式来活化凝血因子X，以免凝血因子X可被活化凝血因子X、凝血酶等杂乱地激活。催化区含有254个氨基酸残基，是凝血因子X活性部位所在的区域，活性中心为组氨酸236、天冬氨酸282和丝氨酸379。
凝血因子X在体内处于内源性凝血途径和外源性凝血途径的共同通路，在凝血反应中起到至关重要的作用。活化的凝血因子X可以在凝血因子V、Ca2 和磷脂的作用下把凝血酶原活化为凝血酶，近年的研究表明，凝血因子X的Arg347、Lys351和Lys414是与凝血因子V结合的重要位点。除此以外，凝血因子X还可以激活凝血因子Ⅶ。
1.1.2 目的与意义
目前来说，凝血因子X的原料的来源十分广泛且容易获取，但凝血因子X的应用研究尚不多，主要是因为凝血因子X发现的时间较晚且在原料中含量少。不过已经有了不少将其作为凝血酶原的活化酶之类等等的研究，如可以将其制成亲和层析的固定化酶用于凝血酶原的活化，这种固定化酶还可以参与抗凝血酶Ⅲ的制备。同时，凝血因子X也具有一些凝血酶所不具备的有点，比如其高选择性与高稳定性，所以凝血因子X可以依次制成新型的止血药。而凝血因子X本身的蛋白质结构分析也对诸多项目有重要意义。
凝血因子X的活性分析在临床医学中也有较为广泛的应用。有研究指出，可以通过测定肝病患者凝血因子X的活性并与健康人的凝血因子X的活性进行比对，可以反应患者肝脏的损害程度，除此之外，凝血因子X的活性测定对于各种血液病尤其是急性白血病的疗效和预后评价具有指导意义。因此凝血因子X的活性可以作为临床检测的一种指标。
本论文的目的一是在于实验高效的凝血因子X的提取纯化方法，达到较高的产率，并能够成功激活与保存；二是实验凝血因子X的活性检测方式，正确成功测定其活性。
