一、课题背景
在生物制药生产实践过程中，经常会使用到一些相关的工具酶如肠激酶等，这些工具酶使用量低微，在后期生产过程中易产生残留，这些工具酶的含量非常低微，常规仪器分析技术如高效液相色谱等难以满足检测需要。由于免疫酶标记法具有特异性好、灵敏度高的特点，因此，本实验拟通过制备肠激酶的多克隆抗体，建立免疫酶分析方法，对相关生物原料药中激酶含量进行定量分析。
二、研究目的
用肠激酶免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，纯化并进行酶标记，建立肠激酶定量免疫分析方法。
三、实验方法
- 动物免疫
选取健康新西兰大白兔（雄性，2 kg），采用颈背部两侧皮下多点注射法，按免疫程序用重组肠激酶与等量弗氏佐剂（其中，初免用弗氏完全佐剂，加强免疫用弗氏不完全佐剂）充分乳化后接种大白兔。于每次免疫后第十四天经耳静脉采血，分离血清。采用间接ELISA法测定肠激酶特异性抗体效价。于最后一次加强免疫后第十四天，经颈动脉取血，分离血清，无菌分装，保存于－20℃备用。
- 多克隆抗体的纯化与鉴定
采用饱和硫酸铵沉淀法纯化抗血清，Western blot测定其特异性。
- 酶标记多克隆抗体
采用高碘酸钠氧化法用辣根过氧化物酶标记多克隆抗体，并对标记抗体的质量进行考察。
- 肠激酶免疫分析的建立与初步应用
分别建立肠激酶定量免疫分析法：竞争ELISA法和夹心ELISA法，考察其方法学相关特性，并应用于相关样品中肠激酶残留的检测。
四、文献综述
剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付
