无花果多糖体外抗肿瘤活性研究
摘要：从无花果中提取,分离和纯化得到了均一性无花果多糖FCPS-1,FCPS-2,FCPS-3,通过测定DPPH自由基清除率,超氧阴离子自由基清除率,羟基自由基清除率,还原能力研究了其体外抗氧化活性,采用MTT研究了其体外抗肿瘤活性结果表明：以上无花果多糖均表现出与浓度正相关的体外抗氧化活性，其中FCPS-3具有相对更强的体外抗氧化活性。FCPS-3对HepG-2细胞和7901细胞具有更强的体外抗肿瘤活性，在浓度为2.0mgml^-1时，FCPS-3对HepG-2细胞和7901细胞的抑制率分别为57.30％和54.49％。表明无花果多糖可作为潜在的天然抗肿瘤药物。
无花果是地中海暖温带气候地区的一种很常见的桑科植物。研究表明，食用无花果有助于预防静脉阻塞，其高纤维含量还具有通便的作用，而无花果果胶更是可以抑制肿瘤细胞的生长。从无花果中提取的苯甲醛、呋喃香豆素内酯、补骨酯素等多种抗癌活性成分的抗癌效果已得到世界公认。此外，无花果中还富含黄酮、多糖、SOD等具有防治心血管疾病和老年痴呆症的生理活性物质，具有极高的研究价值。近年来，多糖因为具有相对低的毒性和特殊的生物、化学、物理性质而被广泛研究。多糖是无花果中的主要活性成分之一。目前有关研究无花果多糖的提取、分离、结构鉴定等及提高免疫功能作用已有报道。但关于无花果多糖抗氧化和抗肿瘤活性的研究鲜见报道。因此，作者在分离纯化得到均一性无花果多糖的基础上，对其体外抗氧化和抗肿瘤活性进行了研究。
无花果多糖为中药无花果的有效成分之一,既往的研究表明,无花果未成熟果实的乳汁及水提物具有较好的抑瘤作用,并能增强单核巨噬细胞的吞噬功能。本研究旨在探讨无花果多糖的抗瘤作用。
方法:１.无花果多糖的提取、分离与纯化工艺流程：精密称取无花果粉末→氯仿抽提去脂→超声破碎→沸水浸提→过滤、浓缩→Sevage法除蛋白→醇沉→过滤或离心→醇沉物清洗→真空干燥→粗 多糖→大孔吸 附 树 脂 脱 色→DEAE-52离子交换纤维素柱分离得到单组分→SephadexｘG－150葡聚糖凝胶过滤层析得到均一组分→冷冻干燥→精多糖。具体操作：取经过氯仿脱脂处理的无花果粉末，加入20BV的水，超声20min后沸水浸提3h，过滤，滤液浓缩，采用Sevage法除去蛋白，大孔吸附树脂脱色， 醇沉，离心，得到粗多糖FCPS。 取一定量的PCFS溶于双蒸水，上样到已平衡的DEAE-52离子交换纤维素柱上，用蒸馏水和不同浓度氯化钠溶液洗脱，苯酚硫酸法跟踪检测，根据洗脱曲线 的主峰位合并收集液，透析，干燥，得到3个无花果多糖纯化组分。将得到的３个组分分别溶解，上样到已平衡的SephadexｘG－150葡聚糖凝胶过滤层析柱，采用氯化钠溶液洗脱，根据洗脱曲线的主峰位合并收集液， 透析脱盐，冷冻干燥，得到无花果多糖均一组分FCPS－1、FCPS－2和 FCPS-3。
2.对移植性肿瘤的抑制作用:昆明种小鼠(18-22g)按100、200mg/kg灌胃给药连续10d,停药后于小鼠右前肢腋部皮下接种S180肉瘤和EAC瘤细胞,10d后取瘤,称重,计算抑瘤率。结果：无花果多糖对移植性S180、EAC实体瘤的生长有抑制作用,抑瘤率（抑瘤率=(对照组平均瘤重-实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重100%)分别为54.57%、39.32% 和50.93%，58.63%;无花果多糖灌胃给药( 100、200、400mg/kg.day)连续10d ,各剂量组均能使溶血素的生成量增加,且有明显的剂量依赖性,与对照组相比差异非常显著( plt;gt;);也可增强DNFB诱导的迟发性超敏反应,随着剂量的加大, 其作用明显增强,对照组两耳重量差值为11.64士2.80mg,各剂量组的差值分别为14.04士2.61mg,14.36士 5.00mg、16.89士2.62mg;体外给药显示1.56一50ug/ml的剂量皆可使巨噬细胞吞噬中性红的能力增强 ,与对照组比较有显著性差异(P0.05,或 p0.01);结论:无花果多糖灌胃给药或体外用药能够增强小鼠的免疫功能,并呈现一定的抗瘤作用,推测其抗瘤作用可能与增强机体的免疫功能有关。
讨论：众所周知,机体免疫机能降低有利于肿瘤的形成和发展,癌症患者常伴有免疫功能的低下及免器官的萎缩。因此,抗肿瘤药物可通过增强机体的免疫机能来防治肿瘤。近年来,国内外大量研究表明,来源于植物和微生物细胞壁的重要成分多糖能提高机体的免疫功能,并能诱生多种细胞因子的产生,具有良好的抗肿瘤作用。无花果多糖是从中药无花果中提取的有效成份,已往的工作证实,它能提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能;促进小鼠抗绵羊红细胞空斑形成细胞的生成 ;增强T细胞介导的迟发型超敏反应等。本实验证明无花果多糖对小鼠移植性肿瘤S180和EAC实体瘤的生长均有 显著抑制作用,两批实验结果基本一致,抑瘤率均大于39%。但量效关系不同瘤株、接种部位不同性别不同有一定差别。对荷 S180小鼠大剂量抑瘤率反而降低,而对荷EAC小鼠肿瘤的抑瘤作用 ,呈现较好的量效关系。预防性给药对腹水瘤小鼠的生存期与对照组相比没有显著差异 ,但给药组动物的一般 状况如进食量、毛发的光泽度、动物的行为状态等明显好于对照组。这种实验结果的差异尚需进一步探讨 。实验中还发现该药在抑瘤的同时亦能恢复荷瘤 所致免疫器官重量的下降。可以推测, 无花果多糖的抗瘤机理可能与激活机体的免疫系统有关。但其 确切机制与抗瘤作用之间更深层的关系还有待进一步研究 。
参考文献：
[1] VEBERIC R,COLARIC M,STAMPAR F.Phenolic acids and flavonoids offig fruit(Ficus carica L.)in the northern Mediterranean region[J].Food Chem,2008,106(1):153-157.
