研究目的：
药物血浆蛋白结合率是药物与血浆蛋白结合的量占药物总浓度的百分率，是药物代谢动力学的重要参数之一。它影响药物在体内的分布、代谢与排泄，从而影响其作用强度和时间，并往往与药物的相互作用及作用机制等密切相关。因此药物血浆蛋白结合率的研究无论对于新药研究开发还是指导临床合理用药都具有重要的意义。研究血浆蛋白结合率的方法包括常规的平衡透析法、超滤法、超速离心法、凝胶过滤法等。随着药代动力学及临床药理学的迅猛发展、又产生了一些新的测定方法、如微透析法、高相亲和色谱法、高效前沿分析等。
研究方法：
1. 平衡透析法
平衡透析法基于药物结合的平衡原理，是测定药物游离浓度常用的方法。该法具有简单、经济、受实验因素干扰小等优点。是研究药物血浆蛋白结合率的经典方法。但是该法也存在一些缺点：1）透析平衡时间较长。2）血浆和缓冲液的pH值以及离子强度必须严格控制。3）受稀释作用、Gibbs-Donnan效应以及体积迁移效应的影响。4）非特异性的透析设备表面的药物吸附效应。为了缩短检测时间，提高样品分析的通量，目前采用96孔平衡透析装置进行血浆蛋白结合率的测定。该装置的独特设计是表面积/体积达到最大化、测定方法自动化，能够减少非特异性的透析设备表面的药物吸附，并且能够加速待测样品的溶解，缩短平衡时间。Fung等使用96孔板与液质联用检测技术相结合，对血浆蛋白结合进行半自动高通量的测定，与传统的测定方法相比，该法能够同时测定32种化合物的蛋白结合率。针对于高蛋白结合率药物游离浓度很低、通常难以测定的特点。Eriksson等开发了比较平衡透析法，通过对不同动物血浆进行比较测定相对血浆蛋白的结合性质，特别适合如丙戊酸等血浆蛋白结合率的化合物的测定。
2. 超滤法
超滤法利用半透膜原理，设备简单、操作方便、不受稀释效应和体积迁移的影响。其最大优点是实现血浆中游离药物的快速分离，仅十几分钟至数十分钟即可收集到足够供测定的血浆超滤液，加之与高灵敏度的液质联用检测技术相结合，超滤法已广泛用于大规模生物样品的游离药物浓度测定。但此法也存在一定弊端：）分离工程中结合平衡不稳定。2）对高蛋白结合率药物的游离浓度难以准确检测。3）结合药物在透析滤膜时会出现泄漏。4）超滤装置对药物具有吸附性。
为解决超滤工程中非特异性超滤装置表面的药物吸附问题，在测定皮质激素与血浆蛋白结合的过程中。Taylor等对传统超滤法进行了 改进，解决了可溶性差以及药物的吸附问题，使方法特别适合于先导化合物的优化。此外，采用超滤法结合高效液相色谱法测定黄岑苷与人体血浆蛋白的结合也有报道。
3. 微透析法
微透析法是近年来发展起来的直接测定体内血浆、组织和其他生理体液中药物游离浓度的测定方法，其最大优点是可以在基本不干扰生物体内正常生命活动的情况下进行实时采样和在线分析，可连续研究在生理条件下体内药物与蛋白的结合作用。具体操作如下：将一个函透析膜的微透析探针用外科值于血管或组织间隙，透析缓冲液经探针泵人，血液中或组织液中的游离药物通过浓度梯度扩散经透析膜进入探针，透析液收集一段时间后便可分析测定其中药物的游离浓度。该方法的限制为：1）只可测定药物的游离浓度，得不到总浓度或结合药物浓度的信息。2）受探针性能的影响，药物的回收率也受到限制，特别是蛋白结合率很高的疏水性药物，回收率较低的问题很严重。Tsai等加入牛血清白蛋白，甘油以及beta;-环糊精等，提高了疏水性药物的回收率。3）缺少足够灵敏的分析方法。近年来，微透析与高效液相色谱毛细管电泳或质谱等分析仪器联用在生命过程动态变化的研究中显示出很好的发展前景。此外，采用微透析法对盐酸平阳霉素和青藤碱血浆蛋白结合的研究均表明该法具有准确性和可行性。
