1、拟研究和解决的问题
血管内皮生长因子(VEGF, vascular endothelial growth factor)及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2，人VEGFR-2也称为kinase insert domain-containing receptor, KDR)是调节血管生成、内皮细胞增殖和迁移等的关键调控因子。通过阻断VEGF与VEGFR-2的结合可抑制新生血管形成，而新生血管的形成是肿瘤生长和转移的基础[1-2]。VEGF/VEGFR-2是目前报道的最重要的血管生成抑制剂作用靶点，随着人们对 VEGF及VEGFR-2功能的不断探索，VEGF/VEGFR-2及其介导的信号转导通路在肿瘤的发生、发展中所发挥的关键作用也逐渐被人们所认识。
表皮生长因子受体(EGFR, epidermal growth factor receptor)作为一类细胞信号转导的关键因素，其过度表达或高表达已被证明与某些肿瘤存在密切关系。其高表达患者预后差，易发生早期转移，复发时间短，复发率高，存活期短。EGFR经过人为干预使之降低后可以明确改善癌症患者预后[3]。这就使以EGFR胞外区作为药物作用的靶点，利用配体或抗体将治疗分子运送到高表达EGFR肿瘤细胞的方法成为靶向治疗癌症的一个新思路。
本实验采用已经构建成功的抗EGFR/KDR(VEGFR-2)双特异性双链抗体（Diabody, Db）重组载体转化成功的大肠杆菌，通过表达、制备、分离、纯化等过程得到纯度较高的抗体蛋白，并进行双特异性抗体对鸡胚尿囊膜A431移植瘤抑制作用的实验研究。
2、采用的研究手段
①抗EGFR/KDR(VEGFR-2)双特异性双链抗体(Db)的表达及制备[4]
构建的重组基因序列中含有pelB信号肽前导序列，其可将表达的双链抗体蛋白导入细菌周质空间，采用渗透压休克法(osmotic shock)提取可溶性抗体蛋白。
②抗EGFR/KDR(VEGFR-2)双特异性双链抗体(Db)的纯化
经破壁粗提取得到的抗体蛋白上清液经镍柱吸附洗脱，进一步纯化得到电泳纯蛋白，采用SDS-PAGE电泳对蛋白的分子量进行鉴定，并超滤提纯。
