以水蛭素为融合伴侣表达艾塞那肽的新方法文献综述

 2023-01-09 17:34:56

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、拟研究的问题

本实验旨在以水蛭素为融合伴侣建立一种新的生产艾塞那肽的融合表达系统,以重组水蛭素III为融合伴侣,将艾塞那肽拼接于重组水蛭素III下游,同时在两者之间设计一个含TEV酶切位点的连接肽,通过TEV酶切割,释放出与天然艾塞那肽完全一致并且具有葡萄糖刺激胰岛素释放的生物活性的目的多肽。该融合表达系统既可增强目的产物艾塞那肽的稳定性,避免了宿主细胞蛋白酶的降解,又提高了其表达量。由于融合蛋白系统的建立以及融合蛋白的表达工作在前期已经完成,因而本课题拟研究的主要问题在于融合蛋白的分离纯化及酶切方法研究以及目的多肽活性的研究与测定。

二、研究目标、采用的手段

u 研究目标:

本研究以水蛭素为融合伴侣建立一种新的生产Exendin-4的融合表达系统,将Exendin-4拼接于水蛭素融合伴侣下游进行融合表达,在两者之间设计一个TEV酶酶切位点的连接肽,融合蛋白表达后即可利用TEV酶进行切割从而释放与天然Exendin-4完全一致的且具有葡萄糖刺激胰岛素释放的生物活性的目的多肽Exendin-4

u 研究手段:

1、 融合蛋白的分离纯化

将发酵液预处理后,经大孔吸附树脂HP20疏水层析,SP sepharose fast flow阳离子交换树脂,QFF sepharose fast flow阴离子交换树脂后得到融合蛋白。对分离纯化得到的产物进行Tricine-SDS-PAGE电泳,然后进行纯度分析,比活力测定。

2、 目的肽段的分离获得

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